蛋白分离的不连续缓冲系统的比较
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在电泳开始的时候,SDS-PAGE 利用不连续系统,在浓缩胶中浓缩或"堆积"样品,使其成为一条非常锐利的区带。在不连续缓冲系统中,最初胶中的阴离子不同于(或不连续)电泳缓冲液中开始时的阴离子。
NuPAGE系统(Bis-Tris和Tris-Acetate)和Laemmli(Tris-Glycine)系统二者均为不连续系统的例证,以相同的方式起作用。但是,作为NuPAGE系统中不同离子的结果,这个系统在一个较低的pH值下工作。
Tris-Glycine系统(图1)的情况,主要包括三种离子:
a)氯(-),由胶缓冲液提供,由于相对于系统中其它的阴离子,阳极对它具有最高的吸引,因而充当先导离子。
b)甘氨酸(-),电泳缓冲液提供的主要的阴离子,由于在一个带电的环境中,它仅仅部分带有负电荷,并且保持在带有更高电荷的氯离子的后面,充当后随离子。
c)Tris碱(+),出现在胶和电泳缓冲液中的共同的离子,在电泳时,Tris-Glycine系统中凝胶和缓冲液的离子形成了胶分离区域的9.5的工作pH值。
图1 Tris-Glycine System
NuPAGE® Bis-Tris系统(图2)的情况,主要包括三种离子:
a)氯(-),由胶缓冲液提供,充当快速移动的先导离子。
b)MES或MOPS(-),(取决于电泳缓冲液的选择)充当后随离子。
MES: 2-(N-morpholino)ethane sulfonic acid
MOPS: 3-(N-morpholino)propane sulfonic acid
c)Bis-Tris碱(+)充当出现在胶中的共同离子,Tris(+)由电泳缓冲液提供。
合并低pH值的胶缓冲液(pH6.4)和电泳缓冲液(pH7.3-7.7)导致了电泳时显著降低的工作pH值。
图2 NuPAGE® Bis-Tris System