材料与仪器
蛋白质
Tricine样品缓冲液 考马斯亮蓝染色液 乙酸
电泳仪 离心机
Tricine样品缓冲液 考马斯亮蓝染色液 乙酸
电泳仪 离心机
步骤
1. 按“Laemmli凝胶电泳法”的步骤1~7,配制溶液并灌制分离胶和积层胶。
2. 制备样品,但采用2×Tricine的样品缓冲液,加样前样品于40℃处理30〜60 -11。多肽分子量标准混合物用作多肽分离的对照。
3. 组装电源装置并加样。但加样孔是以Tricine阴极缓冲液或水加以冲洗并以之充满;在电泳装置的下缓冲液槽加入阳极缓冲液,上缓冲液槽加入阴极缓冲液。
3. 组装电源装置并加样。但加样孔是以Tricine阴极缓冲液或水加以冲洗并以之充满;在电泳装置的下缓冲液槽加入阳极缓冲液,上缓冲液槽加入阴极缓冲液。
4. 连接电源,在30 V 恒压下电泳1 h 后,接着在150 V 恒压下电泳4 h。使用热交换装置使电泳缓冲液槽温度维持室温水平。
5. 当考马斯亮蓝G-250示踪染料到达凝胶的底部时,将电压调回零并断开电源。
6. 取出凝胶,在考马斯亮蓝G-250染色液中染色2 h,接着在10%乙酸水溶液中脱色,每隔30 min 换液1次,直至背景干净为止,需要更高检测敏感度时,推荐采用银染的方法。
来源:丁香实验