反转录病毒原液检测实验

1. 在开始分析的前1天，按1：50将NIH 3T3细胞分传于3个6 cm 培养皿中。将1个培养皿标记为阳性对照，1个为阴性对照，1个用于待测病毒原液。 2. 含有选择标记的待测病毒的制备：加0.01 ml 800 μg/ml polybrene至1 ml 待测病毒上清中，通过0.45 μm 滤器过滤。 3. 含有选择标记的阳对照的制备：制备1 ml 无辅助病毒的病毒原

1. 加50 μl RT反应混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每个待测或对照样品占一孔。加10 μl 病毒上淸，盖上平板，置于37℃培养箱中温育1~2 h。 2. 将各反应液10 μl 点于一张2.5 cm 直径的圆形DE52或DE81滤纸上，其上盖一张塑料薄膜用2号铅笔做标记。 3. 将滤纸置于一个盘中，加2XSSC覆盖。室温下在摇床上轻轻摇动冼涤20 min 弃去

1. 按“Laemmli凝胶电泳法”的步骤1~7，配制溶液并灌制分离胶和积层胶。 2. 制备样品，但采用2×Tricine的样品缓冲液，加样前样品于40℃处理30〜60 -11。多肽分子量标准混合物用作多肽分离的对照。 3. 组装电源装置并加样。但加样孔是以Tricine阴极缓冲液或水加以冲洗并以之充满；在电泳装置的下缓冲液槽加入阳极缓冲液，上缓冲液槽加入阴极缓冲液。