细胞转染

丁香园网友fxlys412：

我是刚刚开始接触实验的，对很多东西我都不太懂。所以想请教下各位达人。

我的问题是：要将一外源性基因转染PC3细胞，然后观察抗肿瘤药物对细胞的凋亡影响。

我现在不知道如何下手，是用腺病毒转染还是脂质体呢？该如何选择？

丁香园网友jollyyyhan认为：

两个都可以啊，我经常用的是脂质体，效率还是蛮高的。不过据说瞬时表达效率高，稳转的好像病毒载体要好筛选一点呢

丁香园网友fxlys412：

我是想用腺病毒载体转染，但听说病毒转染前期准备很麻烦，现在脂质体转染用的比较多。腺病毒载体有很多种，该如何选择？还请有这方面经验的前辈能够交流一下经验，如何做转染以及筛选、单克隆。谢谢！

丁香园网友丁香骑士认为：

腺病毒载体转染，外源性基因并不整合到细胞的染色体上，优点是转染效率高，转染的时候方便，但前期准备很麻烦，例如目的基因的克隆，克隆到T载体，再和骨架载体同源重组，转染293细胞，出毒，过柱纯化等，也可以找公司外包（从头到尾大约1万多吧）。现在有逆转录病毒系统，可以整合，你可以考虑下。

脂质体转染，外源性基因可以整合到细胞的染色体上，但整合是个随即事件，效率不高。

不知道你有构建好目的基因的质粒没有，如果没有就要做构建质粒，提取质粒等前期工作。质粒通过脂质体转染细胞的效率不高，目的基因整合到染色体上更是个随机事件，所以效率更进一步降低。

你选择的时候把这些问题（试验目的，试验时间，实验室条件，试验经费等等）都应该考虑到。

丁香园网友fxlys412：

我是构建了真核表达质粒PcDNA3.1，然后想通过脂质体做稳定转染，使其目的蛋白再宿主细胞中稳定表达，但就是不知道能不能做的出来，万一转染率太低了的话，该怎么办？如何不用脂质体转染，还可以用什么方法可以达到实验得目的？望达人指点一二，在下不胜感激！

丁香园网友szy350121认为：

我个人认为还是用脂质体转染比较方便高效。PC3细胞为已经建系的细胞，它对脂质体等耐受性比较高，所以只要你转染用的质粒纯化的比较好（除内毒素等等）应该没有问题。

如果你想提高基因的表达效率，可以将质粒线性化之后再进行转染，这样可以提高整合效率，当然这是以降低转染效率为代价的。因为，但是超螺旋的质粒比线性化的转染效率高。可以同时进行两种转染。