关于膜蛋白和膜脂类溶解问题

问：我要检测ER的膜蛋白，从心脏组织中提取，采用了超速离心的方法，具体就是首先组织匀浆，20000G离心15分钟，取上清，再100000G离心，得到的沉淀应该是还有ER的，但是我试了不同的buffer去重悬，效果都不是很好，甚至2X的电泳buffer(含有1%SDS)都无法使得沉淀充分的溶解，可以看到有一块状的，几乎不可溶解，我开始是觉得离心力太大部好溶解了。

后来换了一种方法，组织匀浆之后， 6500G离心，得到的沉淀一样在2X的电泳buffer中不可溶解，我现在想是不是由于膜蛋白还是紧密地存在于脂双层中，故而溶解效果不好呢？ 想知道这样的沉淀因该如何处理才可以很好的重悬或者溶解呢？是由于膜脂类的原因还只组织的杂志导致了很难溶解呢？

因为我觉得2X的电泳buffer(含有1%SDS）作用很强了，而且很多方法都推荐作电泳的话用 2X的电泳buffer(含有1%SDS） 来溶解的道的沉淀。

答：全部溶解是不可能的。根据我们的经验，不溶的应该是很少部分，块状好象不常见。超声加热试试。

答：后来换了一种方法，组织匀浆之后，6500G离心，得到的沉淀一样在2X的电泳buffer中不可溶解，6500g离心的话ER应该在上清吧？

溶解膜蛋白估计要试不同的条件，当然SDS应该是最强的了。我遇到有的膜蛋白triton不能溶的，加1 M 的NaCl还不行，加EDTA还不行，但换成别的detergent就可以了。一般来说OG溶解能力比较强。有的必须要加EDTA才能从膜上释放下来。