Qiagen公司的琼脂糖凝胶回收试剂盒使用心得

MinElute Gel Extraction Kit

品牌：Qiagen

回收范围：70bp-4kb

价格：（50包装1,485，约29元/反应）

特点：

• 洗涤体积只要10ul，回收产物浓度高，方便后继实验

• 使用方便快捷（wash-and-spin)

• 高回收率

• 回收产物纯度高，可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连接转化、酶切、标记、PCR、显微注射、体外转录等后继实验

使用心得：

如果要回收片断量本来就很少，比如只有几十个ng，用常规的试剂盒洗脱得到将近50ul的产物，连接反应就很难做要不体积很大，要不会觉得浓度太低。如果是用来做显微注射、标记等实验就更难受，只能再浓缩一次，不但麻烦，多一次操作也会导致产物进一步的损耗。

这一点，就是快速的柱回收试剂盒比传统方法不如的地方，因为传统方法得到沉淀后可以按照需要溶解得到自己需要的浓度，柱回收就不行。MinElute就是为这个需要而诞生的。

MinElute胶回收试剂盒是基于一种特殊的Silica gel menbrane的膜技术，能在高盐浓度的条件下迅速吸附DNA，在低盐或者纯水条件下释放DNA，只要短短几分钟，就能彻底除去包括引物、核苷酸、酶、矿物油、盐、琼脂糖、EB以及其它杂质，和以前QIAGEN的Silica gel menbrane有所不同的是，它要求的洗脱体积非常小，只要10ul（当然这更要注意让洗脱液加在膜上），纯化的DNA是高度浓缩的，回收率在80%以上。这样就非常适合用于后继实验操作，不需要再浓缩一次。

MinElute为了确保高质量和高回收率，利用了特殊的binding buffer，这种缓冲液是特别设计和优化了的，可以增加DNA分子特异性吸收，减少杂质，不过也带来了一个问题，那就是导致MinElute的DNA吸附范围是70bp到4kb，而不是以往的10kb，因此4kb以上的只能用Qiagen的Qiaquick或其它产品了，而10kb以上就该用QIAEX II系列。此外MinElute柱子的载量是5ug，毕竟洗脱体积这么小。

体积小则小矣，可是质量并不含糊，回收的产物可以用于PCR、克隆、标记、测序、体外转录等后继实验，也同样可以用于显微注射、芯片分析等要求非常严格的实验。你尽管可以说，我又不需要做那些严格实验，我就克隆PCR什么的就够了，哪儿要那么纯然而你也不能否认这本来就是一种质量可靠的信心保证。

除了以上几个方面，MinElute系列产品正如Qiagen其它产品一样：讲究精确完美，注重细节品质。

MinElute有三种上样Buffer染料颜色（青、蓝和黄），方便样品分析，并且也包含pH目测指示染料，可以在溶胶的时候帮助指示实验错误（pH值对胶回收影响较大，见下）错误的颜色代表了凝胶Buffer重复使用等实验配置不当导致的不正确化合物，这种情况可通过醋酸钠进行调整。