厄贝沙坦是AT1受体阻断剂,临床上用于高血压病的治疗。由于该药疗效确切,在治疗剂量下(常用量为50-300 mg/d,耐受量>900 mg/d),几乎无不良反应,因此可望成为抗高血压的一线药物。药代动力学研究表明,厄贝沙坦胶囊口服吸收较快(Tmax 1.5-2h),其绝对生物利用度约为60%-80%,半衰期t1/2 约为11-16 h,该药主要通过代谢后从尿中排出体外,原形肾排不到3%。
试验目的
本试验旨在研究国产厄贝沙坦胶囊的相对生物利用度,为它是否与剂量相同的进口厄贝沙坦胶囊具有生物等效性提供依据。
生物样品分析方法的建立和验证
采用HPLC法测定血药浓度
1,样品制备:样品制备过程中,高、中、低三个浓度的提取回收率高于50%
2,HPLC测定条件:
3,特异性:
须证明所测定物质是受试药品的原形药物。生物样品所含内源性物质或代谢物不得干扰对样品所测物质的分析。应提供空白生物样品、标准品、空白生物样品加入标准品及用药后生物样品的色谱图,以反映分析方法的特异性。
4,最低定量限:
最低定量限(LOQ)是标准曲线上的最低浓度点,又称灵敏度,表示测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度(应能满足测定3-5个半衰期时样品中的药物浓度,或Cmax1/10~1/20时的药物浓度)。
5,标准曲线与线性范围
所测定物质的浓度与响应的相关性,用回归分析方法(如用加权最小二乘法)所得的回归方程来评价。
标准曲线高低浓度范围为线性范围,在线性范围内浓度测定结果应可达到试验要求的精密度和准确度。必须用至少5个浓度建立标准曲线,应使用与待测样品相同生物介质,线性范围要能覆盖全部待测浓度,不得用线性范围外推的方法求算未知样品的浓度。标准曲线不包括零点。
6,精密度与准确度
要求选择三个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察,低浓度选择在最低量限(LOQ)附近,高浓度在标准曲线的上限附近,中间选一个浓度,每一浓度至少测定5个样品。精密度用质控样品的日内和日间相对标准差(RSD)表示,一般RSD应小于15%,在LOQ附近RSD应小于20%。
准确度是指用特定方法测得的生物样品浓度与真实浓度的接近程度,可用相对回收率表示,一般应85%~115%范围内,在LOQ附近应在80%~120%范围内。
7,样品稳定性
对含药生物样品在冰冻条件下不同存放时间进行稳定性考察,以确定生物样品的存放时间。,
8,质控样品
质控样品系将已知量的待测药物加入到生物介质中配制的样品,用于质量控制。一般配制高、中、低三个浓度的质控样品。
9,质量控制
应在生物样品分析方法确证完成之后开始测试未知样品。每个未知样品一般测定一次,必要时可进行复测。每批生物样品测定时应建立新的标准曲线,并随行测定高、中、低三个浓度的质控样品。质控样品测定结果的偏差一般应小于20%。
志愿受试者
1,志愿受试者条件
性别:男性;
年龄:18~40岁;
体重:标准体重±10%。 [标准体重=身高(cm)-80]×0.7;或=[身高(cm)-170]×0.6+62。全部受试者的体重尽量控制在55-65kg范围内;
不吸烟;
不嗜酒;
经病史询问、全身体检和实验室检查证明健康者;
无药物过敏史和精神病史;
无药物依赖史;
至少两周未服用其它任何药物;
受试期间禁服任何药物;
2,受试者例数:20例。
3,分组方案:
4,签署知情同意书。
参比制剂
Sinofi Pharma 生产的厄贝沙坦片剂,每片150 mg,批号:173
试验制剂
国产厄贝沙坦胶囊,每粒75 mg,批号:
给药方案
1、剂量:两制剂均给150 mg。
2、给药方案:采用双周期随机交叉试验设计,给药方案见表2。
3、洗脱期:1周。
4、取血点:服药前(0小时)、服药后0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,4,8,12,24,36,48,60小时从静脉采血3 ml。立即离心,血浆储存在-20°C保存。详细记录采血准确时间。
预试验(略)
数据处理
(一)、药代动力学基本参数的计算:
1. AUC0→60:梯形面积法,单位:mg×h/ml;
2. AUC0→€ = AUC0→60 + C60/K;
3. 消除速率常数(Ke):以二乘法求出消除相的最佳曲线以斜率K和2.303相乘,得Ke值;
4. T1/2 = 0.693/Ke;
5. Tmax (达峰浓度时间)和Cmax(峰浓度)用实测值;
6. 总清除率:CL/F = D/AUC0→€ (D为给药剂量);
7. 分布容积:Vd/F = (CL/F/ke)
8. 相对生物利用度:F = AUC0→60,试验制剂/AUC0→60,参比制剂 (%)或F = AUC0→€ ,试验制剂/ AUC0→€ ,参比制剂 (%),采用各个受试者的AUC分别计算出各自的生物利用度F值,然后计算全部受试者F值的均数和标准差。
(二)、生物等效性评价
对受试制剂与参比制剂的生物等效性评价,应从药物吸收程度和吸收速度两方面进行。药代动力学参数AUC和Cmax,经对数转换后进行交叉试验的方差分析与双单侧t检验处理。若受试制剂AUC的90%可信限落在参比制剂80~125%范围内,Cmax的90%可信限落在70~143%范围内,Tmax经非参数法检验无差异,可认定受试制剂与参比制剂生物等效。
提供的数据
分别提供每个受试者的血药时间、浓度原始数据和由之计算出的药物代谢动力学参数,同时还应提供药时曲线。
Cmax,Tmax,AUC,生物利用度;
其它药物代谢动力学参数:ke、T1/2、Vd等;
生物等效性的评价结论及过程。
资料整理和保存
1、资料保存于遗传药理学研究所。
2、 应归档的资料包括:
(1)受试者个人知情同意书;
(2)临床试验记录;
(3)色谱图;
(4)数据和统计学处理资料;
(5)科研记录本;
(6)其它关于试验的所有有关资料。