过氧化氢酶和过氧化物酶的作用

一、实验目的

1.了解过氧化氢酶的作用，掌握常用的测定过氧化氢酶的方法。

2.了解过氧化物酶的作用，掌握常用的测定过氧化物酶的方法。

二、实验原理

氧化物酶是植物体内普通存在的、活性较高的一种酶。它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化在过氧化物酶催化下，H 2 O 2 将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470nm 处有最大光吸收，故可通过测470nm 下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性(愈创木酚法)。

过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系。过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

因此，可根据H 2 O 2 的消耗量或02的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量(反应过量)的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的过氧化氢，即可求出消耗的H 2 O 2 的量。

三、 仪器 、原料和试剂

(一) 测定过氧化氢酶

仪器 722型分光光度计，离心机，研钵，容量瓶，试管，吸管

原料

马铃薯块茎。

试剂

1. 0.05mol/LpH 5.5的磷酸缓冲液；
2. 0.05mol/L 愈创木酚溶液；
3. 2％H 2 O 2 ；
4. 20％三氯乙酸。

（二）过氧化物酶活性的测定

仪器

研钵，三角瓶，酸式滴定管，恒温水浴锅，容量瓶；

原料

小麦叶片

试剂

1. 10％H 2 SO 4

2. 0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液

3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液：称取KMnO 4 3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，再用0.1mol/L 草酸溶液标定。

4. 0.1mol/LH 2 O 2 ： 市售30％H202大约等于17.6mol/L，取30％H 2 O 2 溶掖5.68mL，稀释至l000mL，用标准0.1mol/LKMnO 4 溶液(在酸性条件下)进行标定。

5. 0.1mol/L 草酸：称取优级纯H 2 C 2 O 4 ·2K 2 O12.607g 用蒸馏水溶解后，定容至1000mL。