高效液相色谱柱柱效测定

一、实验目的

1．了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理

2．学习高效液相色谱仪的使用

3．学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法

二、基本原理

高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的。气相色谱中评价色谱柱柱效的方法及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱，即：

式中：tR为组分的保留时间

Y1/2为色谱峰的半峰宽度

Y为色谱峰的峰底宽度

三、仪器和试剂

1．KLC321型高效液相色谱仪（紫外检测器）

2．FJ-2000色谱工作站

3．25μl微量进样器

4．超声波清洗器

5．试剂：苯、萘、联苯、甲醇均为分析纯；纯水为重蒸的去离子水。

配制成含苯、萘、联苯各10μl/ml 的甲醇溶液。

四、实验条件

1．色谱柱 长15cm，内径 3mm，装填10mm的C-18烷基键合固定相

2．流动相 甲醇:水（85:15），流量0.8ml/min

3．紫外光度检测器 波长254nm，灵敏度0.08

4．进样量 5μl

五、实验步骤

1．将配制好的流动相置于超声波清洗器上脱气约30min。

2．根据实验条件，按仪器操作步骤将仪器调节至进样状态，待仪器流路及电路系统达到平衡，色谱工作站之“采样系统”基线平直时，即可进样。

3．吸取5μl苯、萘、联苯的甲醇溶液进样，并用色谱工作站记录色谱数据，同时记录色谱数据文件名。

4．用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件。

六、数据记录及处理

1．记录实验条件。

（1）色谱柱与固定相

（2）流动相及其流量、柱前压

（3）检测器及其灵敏度

（4）进样量

2．记录色谱峰的保留时间tR和相应色谱峰的半峰宽Y1/2。

3．分别计算苯、萘、联苯在该色谱柱上的理论塔板数n。

七、思考题

1．由本实验计算出的各组分理论塔板数说明什么问题？

2．紫外光度检测器是否适用于检测所有有机化合物，为什么？