丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

流式细胞术应用 | 13 色淋巴亚群免疫功能检测

贝克曼库尔特

9870

实验简介

13 色淋巴亚群免疫功能检测,利用高度集成,卓越检测性能的 CytoFLEX 对外周血中高度异质的 T 淋巴细胞亚群进行分析,10 色 Duraclone IM T 细胞试剂盒 (CD45RA-FITC,CD197-PE,CD28-ECD,CD279-PC5.5,CD27-PC7,CD4-APC,CD8-Alexa-Fluor 700,CD3-APC-AF750,CD57-Pacific Blue,CD45-Krome Orange) 为贝克曼最新用于淋巴亚群检测的干粉试剂。

加上 3 个液体试剂 (CD95-BV 605TM,CD25-BV650TM 以及 CD127- BV768TM ) 可进行 T 细胞 (CD3+)及其亚群细胞 T4(CD3+CD4+),T8 细胞(CD3+CD8+),中央记忆 T 细胞(CD45RO-CCR7+),效应记忆 T 细胞(CD45RO-CCR7-),天然 T 细胞(CD45RO+CCR7+)。

调节 T 细 胞(CD4+CD25+CD127low),干样 T 细胞(CD45RA+CCR7+CD95+CD127+)百分比及数量检测,有助于了解机体所处于的免疫功能状态,对疾病的辅助诊断、疗效评估、预后判断等十分重要,对机体亚健康状态的诊断及发生相关疾病的风险评估具有重要意义,也是近年来研究的热点之一。

材料与方法

▶ 试剂

▶ 样品制备

Sample Typ

外周血
Species
Age of specimen新鲜 EDTA 抗凝
Prep Method

1. 取新鲜抗凝人外周血 100 ul 放入 Duraclone T panel 流式管底,再各加入 5 ul 述 适量的抗体(CD95-BV605TM, CD25-BV650TM 以及 CD127-BV768TM),涡旋 30 sec,充分混匀;

2. 室温避光孵育 15 min;

3. 加入 1 mL 溶血素 Versa lysis,和 50ul 固定剂 IOTest 3 Fixative Solution(试剂均来 自 Beckman)涡旋 30 sec,充分混匀,并避光孵育 20 min;

4. 待红细胞溶解充分后,200 g 离心 5 min 去除上清, 并加入 3 mL 1 x PBS 洗涤一 次,离心,重悬于 500 ul 1 x PBS, 上机检测。


▶ 数据分析

1. 创建一个新的实验;

2. 按下图选择相应的通道及建立实验方案;

3. 采集的数据以 Lymph 门内至少获取 20000 个 events。

淋巴细胞(Lymph)通过 CD45/SS 设门,进一步利用 CD3/SS 散点图圈选淋巴细胞门内(Lymph)的 CD3+ 细胞, 对 CD3+ 细胞进行 CD4/CD8 作图,并分别对 CD4+,CD8+ 细胞 CCR7/CD45RA 表达情况进行分析, 四象限 分别代表纯真 T 细胞(CCR7+CD45RA+),效应 T 细胞(CCR7-CD45RA+),中央记忆 T 细胞(CCR7+CD45RA-), 效应记忆 T 细胞(CCR7-CD45RA-)。

对 CD4+ 细胞 CD4/CD25 作图可分析调 T 表达,对 CD4+CD25+ 的细 胞进一步设门至 CD127/CD45RA,分析天然调 T 细胞(CD127+CD45RA+)以及记忆调 T 细胞(CD127+CD45RA-), 效应调 T 细胞(CD127 hi+CD45RA-)。T8 细胞的成熟过程及活化可以用 CD27/CD28,CD57/CD279 散点图分析。

纯真 T 细胞(CD3+CCR7+CD45RA+)关联至 CD27/CD28,双阳性细胞群进一步关联至 CD96/CD127 散点图, 其中 CD96 hi+CD127+ 的细胞群为干样 T 细胞,具有分生潜能的 T 淋巴细胞。

实验结果

该 13 色的 T 淋巴亚群 panel 不仅可检测最常见的 T 淋巴亚群抗原,而且更注重对 T 淋巴细胞亚群及功能的研究, 初始 T 细胞及效应 T 细胞,以及表达稀有的 Treg 细胞干样淋巴细胞都是临床科研的重要的研究对象,从以上数据可以非常清楚区分各群细胞。

而常规的流式检测需要进行 2-3 管的检测,操作及检测过程复杂,费时费力, CytoFLEX 的卓越的检测灵敏度,以及多达 13 个荧光检测通道,友好的操作系统可以非常轻松地完成非常复杂 的多色检测。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序