多肽合成仪的操作方法

1、准备1mTU/HOBt溶液

1)配制0.5mol/LHOBt的DMF溶液：称量13.5g无水HOBt（相对分子质量135.1），置于250ml烧杯中，加入DMF至200ml。

2)配制0.45mol/LHBTU/HOBt溶液：将上述溶液倒人装有37.9gHBTU（0.1mM）的烧杯或烧瓶中。

3)利用磁力搅拌装置搅拌15min，直到HBTU完全溶解。

4)利用漏斗和滤纸对溶液进行过滤。

5)选择合适的容器收集滤液，备用（该溶液室温下稳定期至少为6周）。

2、氨基基团与生物素结合

1)用DMF洗涤0.1mmol树脂。

2)将0.244g生物素溶解于5ml的DMF-DMSO（体积比1：1）溶液中，可以适当加热以加速溶解。

3)在上述溶液中加入2.1ml0.45mol/LHBTU/HOBt溶液和0.3mlDIEA。

4)将活化生物素溶液加入柱子中，旋转过夜。

5)进行二氢茚三酮测试（无色），确认生物素已经与柱子结合。

6)用2XDMF-DMSO（1：1）溶液洗涤柱子，去除多余的生物素

7)依次用2XDMF和2XDCM洗涤柱子。

8)肽段脱离之前，柱子要进行干燥。

3、将Fmoc氨基酸装入2-ChlorotritylChloride柱中

1)用反应管道称量log 2-ChlorotritylChloride树脂（15mmol），用2XDMF洗涤后，在50ml的DMF中浸泡10min，排尽管道中的液体。

2)用试管称量10mmolFmoc氨基酸，用40mlDMF进行溶解，将溶液转移至上述反应管道中，加入8.7mlDIEA（50mmol），室温下涡旋30min。

3)再向反应管道中加入5ml甲醇，涡旋5min。

4)排尽管道后用5XDMF洗涤。

5)检查替代率。

6)加入50ml20%六氢吡啶，去除Fmoc基团，涡旋30min。

7)依次用5XDMF和2XDCM洗涤后，将树脂放置于泡沫板上的薄纸上，于室温下干燥过夜。将另一张薄纸覆盖在树脂上，轻轻挤压，以破碎聚集物。

8)对树脂进行称重，并装入合适的容器内备用。

4．检查含有Fmoc氨基酸树脂的替代率

1)用微量离心管称量双份5～10mg含Fmoc氨基酸树脂样品，加1.00ml20%六氢吡啶/DMF，振荡20min后，离心使树脂沉降。

2)将100ul上清液转移至装有10mlDMF的试管中，混合均匀。

3)用移液管分别转移2mlDMF到参比杯和样品杯中，将分光光度计调零，利用参比杯调空白后，向样品杯中加入2ml步骤2)中所得溶液，读取光吸收值。

4)利用下列公式进行替代率（Subs）的计算： Subs＝101（A）/7.8（w），式中：A＝光吸收值；w＝树脂的质量（mg）。

5)在301nm处测试光吸收值3次，计算平均替代率。