花粉储藏及花粉生命力的测定

花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过催延花期解决，有的则不得不进行花粉储藏，营此我们必须掌握花粉储藏的原理与技术。

为了避免杂交工作失误，在使用远地寄来的花粉或经过一段时间储藏的花粉之前，必须对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交成果进行分析与研究。

一.实验目的

掌握了鲜花粉储藏及花粉生命力鉴定的方法及原理。

二.实验材料

牡丹、凤仙花、柳树等植物的花粉。

三.仪器及药品

载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、干燥器、小指形管、标签、标记笔、显微镜；冰箱硫酸无水氯化钙、蔗糖、蒸馏水、硼酸（1：100000）。 凡士林、联苯胺、a-萘粉、酒精、碳化钠、过氯化氢、洋菜。

四.实验原理

花粉在低温0℃—2℃、干燥、黑暗等条件下代谢迁都降低，花粉储藏的原理就是创造代谢强度底的环境，以延长花粉有寿命。

鉴定花粉生命力的方法很多，概括起来，不外下列四种：

一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。此法的优点是需时间较长，且实验结果易受气候条件的影响；

二是将待策粉受到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生命力；

三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。后两种方法都是根据花粉萌发力来反映生活力的高低。有一定参考价值，但萌发的不一定都受精，特别是人工萌发环受许多条件的限制，所以也只有相对的可靠性；

四是用染色方法来鉴定华发安的生命力。其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶存在。它可以促进过氧化物（如HO）放氧分解。这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化。在本实验中所用的无色联苯胺a—萘粉都是还原剂，但他们被氧化后却都表现红色或玫瑰红色。

如果花粉是活的，那麽这个反映很快，则花粉被染成红色玫瑰红色：如果花粉是死的，则这一反映迟迟不能进行，花粉也就保持原色。此色优点是比较快捷，但比较间接。

五.实验步骤：

1、储藏花粉：

（1）将采来的花粉进行干燥（凉干或放入盛有氯化钙的干燥器中初步干燥）、一般以花粉部相互黏结为度。

（2）将干燥的花粉装在指形管中（不要太多，一般以无分之一或更少为宜）。瓶口塞以纱布，瓶外贴以标签，注明种类、日期。

（3）指形管放入以下不同浓度的硫酸或无水氯化钙控制的一定湿度的干燥器中，干燥器放于 `温度为0℃—2℃的冰箱内。

2、花粉生命力的鉴定：

（1）固体培养基法；

1）配置培养基；称取1克洋菜，五克蔗糖（化学纯），量取94毫克的蒸馏水。现把水在酒精灯商加热煮开，到入洋菜，使之融化，然后到入蔗糖，用破棒不断搅拌，呈透明壮即可。为保持培养的浓度，可在烧杯商用玻璃铅笔做记号，如水分蒸发应徐徐补充，既配成5%浓度的培养基。同法配成10%、15%、20%浓度的培养基。

2）载平； 用玻璃棒蘸少量培养基，趁热滴在悬铃载玻片的凹槽，放置片刻，使其冷凝。

3）播种花粉： 将上述处理达到的载波片置于黑色纸上然后用解剖针粘少量花粉均匀地撒在培养基上，但不可过多，否则为以后观察带来困难。

4）观察； 把植被好的骗子放在预先掂有湿润吸水纸的培养器内，然后盖上盖、放在20—22c的温箱中培养。牡丹的花粉接种一种小时即可统计萌发率。随即在显微镜下取三个视野，计算花粉总数及发芽数。算出平均出芽率。

（2）悬滴培养法：

1）配培养液： 称取5克蔗糖（化学纯）量取95m1蒸馏水，现把水放在酒精灯上加热烧开，然后到入蔗糖，用玻璃棒搅拌即成5%的培养基。

2）载植： 用蜡环（或玻璃环）和凡士林在悬滴载片的凹点上做一围墙，蜡环（或玻璃环）上缘涂一层凡士林，并往凹点内滴一滴培养液。然后均匀地撒上少量花粉，拿号盖玻璃片在往上提的过程中迅速将它翻转过来（利用这个惯性保持其球面）小心地把玻片平放在蜡环（或玻璃环）上并使其周围没有缝隙。如此便构成了一成笛闭的小室。

3）观察： 把上述制成的片子小心放到培养内（注意在所有悬滴过程中不能使悬滴流跑）然后放到温箱中。 保持22℃¬24 ℃的温度。 牡丹花粉接种 后一小时既可观察 。花粉发芽 检查在 低倍镜下进行，花粉的长度为花粉粒直径2倍以上才算发芽， 一倍以上者算萌芽。

4）染色法：

配制溶液：

a20克联苯胺溶于10的酒精中，盛入褐色瓶中。

b 0.15克一萘溶于100的酒精中，盛入褐色瓶中。

c 0.25克碳酸钠溶于蒸馏水中，盛入白色瓶中。

d 以上三种溶液等量混合，即成“甲液，盛如白色瓶中。

e 将3%过氧化氢，临用前用蒸馏水稀释成0.3%溶液，即成“乙液。

制片：取少量花粉放到悬滴载玻片的凹点内，滴入一滴甲液，再滴一滴0.36%的H2O2，三分钟之后观察之。 统计存活率； 在显微镜下观察凡表现红色或玫瑰红色的都有生命的花粉。黄色或不着色者为没有生命的花粉。