骨髓细胞染色体标本的制备及观察

用骨髓细胞进行染色体标本的制备，不需要体外培养，因此，不需无菌操作，整个过程所需时间短，方法比较简单，一般实验室均可进行。

一、制作方法

1、取样

将25g体重的蟾蜍用颈椎脱臼法杀死。杀死前2～3h，腹腔注射0.1％浓度的秋水仙素溶液(注射量以4μg/g体重计算)。杀死后，取每侧的股骨和肱骨各一根，去净外面的肌肉组织，剪去两头，用注射针头吸入一些生理盐水，将骨髓冲至一小培养皿中，反复几次，将全部冲出物吸入离心管内离心(1000转/min)8min。

2、低渗处理

吸去上清液，加入在37℃中预热的0.4％KCl溶液至5ml，用吸管轻轻吸动，使细胞松散，在37℃温度，低渗20min，离心8min(100转/min)，在离心前加入1ml固定液作预处固定，防止细胞松散。

3、固定

吸去上清液，沾管壁加入甲醇∶冰醋酸＝3∶1的的固定液5ml，固定5min后，用吸管将沉淀物轻轻打匀，再继续固定30min离心8min(100转/min)。 吸去上清液，再加固定液固定一次，用吸管打散静止15～20min，离心8min(1000转/min)吸去上清液，留沉淀物，再加少量固定液混匀，即可制片。

4、 制片及染色

从冰箱中取出预冷玻片，平置在手中，然后，将标本混匀液从一定的高处滴下，并立即用口吹散，在酒精灯上加热干燥。干燥后，将稀释10倍的Giemsa染液(用前稀释)滴于玻片上，染色20～30min，流水冲洗几秒钟，在酒精灯上干燥后，即可置于显微镜下观察。

二、观察

在高倍显微镜下观察蟾蜍骨髓淋巴细胞的染色体。我们可能看到有11对(2n=2×11＝22)等臂的染色单体，每一条都呈V字形。基本形态如下图。在显微镜下，染成红色的为染色体和着丝粒，染成浅蓝色的为细胞质，染色单体没有着丝缢痕和次缢痕。

三、Giemsa 染液的配制

1、Giemsa原液的配制（1ml）

Giemsa粉剂0.5g、甘油(A·R)33ml、甲醇(不含丙酮)(A·R)33ml。 将少量甘油中加入粉剂，用研钵磨至无颗粒为止，再加入全部甘油33ml，放56℃温箱中2h溶化后加甲醇33ml，摇匀后保存于棕色瓶中，用时稀释10倍。

2、磷酸缓冲液（pH=7）的配制

取1/15M磷酸二氢钾溶液38.8ml和1/15M磷酸氢二钠溶液61.2ml混合后，即可得pH=7的磷酸缓冲