新型RNase抑制剂

RNA 酶污染是全体从事 RNA 相关实验的人员的头号公敌。即使是100度高温或者是高压灭菌也不能完全灭活无孔不入的 RNases 。因而相关的实验中往往要用到RNA 酶抑制剂。

最常用的 RNA 酶抑制剂 Human Placental ribonuclease inhibitor （ HPRI ）是一种蛋白质，可与多种 RNA 酶（包括 RNases A, B, C 类）非共价结合成为等摩尔复合物， 抑制RNA 酶活性。 HPRI 需要在 DTT 存在的条件下保持最大活性。包括 RNasin, SUPERase.in, RIP 等几个知名品牌的 RNA 酶抑制剂都属于这个类型。

Prime RNase Inhibitor 是一种全新的非人源的 RNase 抑制剂，和HPRI 一样，能够非共价结合并抑制 RNases A, B, C 类的 RNA 酶活性而不影响RNases T1, T2, H, U1, U2 和 CL3 的活性，因而不会干扰cDNA合成，SP6/ T7， Hela细胞提取物系统的RNA 体外转录，以及在兔网织红细胞裂解液或者是麦胚提取物中进行的体外翻译。

应用范围：

1.体外转录

2.体外翻译

3.第一和第二链cDNA合成

4.在非变性条件下纯化RNA 和mRNA ，

5.RT-PCR ，特别是单细胞 RNA 的 RT-PCR

6.RNA 结合蛋白的分 离

7.gel retardation assays

8.nuclear run-on transcription assays

9.polysome distribution analysis

优点：

比HPRI 更高效率的抑制 RNase 活性，一个单位的 Prime RNase Inhibitor 可以抑制5ng RNase 90 % 以上的活性，而同样情况下HPRI只能抑制50 % 的活性。

完全不需要加入DTT以维持最高活性。在更宽的pH值范围，更宽的 DTT 浓度范围和温度范围保持稳定

可用于非变性条件的 RNA 纯化过程，例如可用于带有 1%Nonidet 溶液的 RNA 抽提试剂，或者是单细胞 RNA 纯化和 RT-PCR

在变性条件下不会释放出已经结合的RNase。

实际上在没有DTT的条件下 Prime RNase Inhibitor 的活性更高，而在2 0mM DTT 下 Prime RNase Inhibitor 仍然有90 % 以上的活性。由于 Prime RNase Inhibitor 是一种蛋白质，所以应该保存于 -20 度，在 -70 度条件下会导致蛋白变性。

FAQ ：

已经加入Prime RNase Inhibitor 后的 RNA 样品应该如何保存？

A ：应该在 -20 度保存。

Prime RNase Inhibitor 成分是什么？是否 HPRI/ 或者 RNasin Ribonuclease Inhibitor 的另一版本？

A ：是一种非人源蛋白。由于商业秘密不能透露。但是是完全不同类型的另一种蛋白。并非重组蛋白。

Prime RNase Inhibitor 是否适用于病毒 RNA 的 RT-PCR ？

A ：当然适合

Prime RNase Inhibitor 是否适合于原来可以用 HPRI （ Human Placental RNase ）的实验？

A ： 实验表明 Prime RNase Inhibitor 适合于所有可以用 HPRI 的实验，而且效果更好。

Prime RNase Inhibitor 保存期有多长？应该如何保存？

A ：正常情况下至少可保存 12 个月，应该在 -20 度保存而不能在 -70 度条件保存。

Prime RNase Inhibitor 并不能一直所有的 RNA 酶，它只对 RNase A ， B ， C 有显著的抑制效果，和 HPRI 一样的。

当抽提得到 RNA 后需要进行后继实验（例如蛋白质研究），什么时候加 Prime RNase Inhibitor 是最适合的？

A ：在抽提 RNA 后应该将样品分装保存在 -80 度，当准备开始后继实验时，将 RNA 样品取出解冻完全后再加入 Prime RNase Inhibitor 。

Prime RNase Inhibitor 是否抑制 RNase H 活性？

A ：不， Prime RNase Inhibitor 只抑制 RNase A B C 而不会抑制 RNase H （RNase H 专门降解 RNA 和 DNA 的杂交链中的 RNA 分子），因此有 Prime RNase Inhibitor 的存在不会影响 cDNA 合成反应，可以用于 cDNA 合成反应。

Prime RNase Inhibitor 是否需要加入 DTT 以激活抑制剂？

A ：不需要，在没有 DTT 的条件下 Prime RNase Inhibitor 的抑制活性最高。

Prime RNase Inhibitor 是否可用于带有异硫氰酸胍的 RNA 抽提试剂？

A ：不可以，由于 Prime RNase Inhibitor 是一种蛋白质，在这个条件下会变性。不过不同于 HPRI ， Prime RNase Inhibitor 在这个条件下不会释放出原来已经抑制的 RNase 。

Prime RNase Inhibitor 是否可用于带有 1%Nonidet 溶液的 RNA 抽提试剂？

A ：完全可以