白磷还原法制备胶体金分散颗粒

胶体金可用多种方法制备，其中应用较为广泛的是化学还原法。这一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原为金原子，可用于制备胶体金的还原剂有50余种，但在生物医学领域内最为常用的还原剂是白磷、柠檬酸三钠以及鞣酸等。

白磷还原法的建立已有近百年的历史，由于此法操作较为简便，制备出来的胶体金颗粒大小较一致，因而应用较为广泛，现以Faulk和Taylor（1971）的报道为基础介绍这一方法。

（1）取1%氯化金1.5mli、0.1mol/LK2CO3 1. 2ml,加入120ml双蒸水。

（2）上述溶液充分搅拌混匀3min以上。

（3）在搅拌条件下将1ml新鲜配制的20%饱和白磷乙醚溶液加入上述混合液中，约在5min内溶液变为棕红色。

（4）将上述混合液加热煮沸，直至变成鲜明的橙红色为止，一般约需10min。

橙红色的出现表明氯化金的还原反应终止，胶体金制备成功。按上述法制备的金颗粒直径为（5.6土0.9）nm。

白磷还原法一般只能制备出单一颗粒直径的胶体金。因此，用于电镜双重标记或多重标记时此法显得有些不足，还需结合其他方法。Henegouwen等（1986）发展了传统的白磷还原法，可制备出多种不同直径的胶体金，取得了良好的效果，具体方法如下。

（1）取0.5ml新鲜配制的20%饱和白磷乙醚溶液，加入到60ml用上述方法制备的胶体金中（5.6nm土0.9nm）充分振摇5rain以上。

（2）将1%氯化金0.75ml及0.1mol/LK2CO3 0.6ml加到上述溶液内，振摇数分钟溶液变成棕红色。

（3）将上液煮沸加热，直至变成鲜明的红色，一般需10min。

上述还原过程使胶体金颗粒直径增大，随着还原次数的增加，胶体金颗粒的直径亦越来越大，二者之间的关系见表。

胶体金颗粒大小与还原次数之间的关系（白磷还原法）

这一方法的特点是通过循环还原的引入使原白磷还原法的适用范围得到扩大，其次，在循环还原过程中氯化金不再形成新的金颗粒，而只与原先的金颗粒结合，使它直径变大。原先加人的胶体金颗粒起着“晶核”的作用。因此可以利用这一方法制备出一系列颗粒直径不同但具有相同颗粒密度的胶体金来。