MHC/多肽四聚体法检测抗原特异性T细胞数量
互联网
4205
MHC/多肽四聚体法检测抗原特异性T细胞数量
T细胞通过其表面TCR特异性识别抗原呈递细胞表面的MHC/抗原肽复合物后，被活化和发生增殖，进而分化成效应细胞。因此，可以用MHC/抗原肽复合物检测T细胞表面的特异性TCR，来反映抗原特异性T细胞数量的变化。
Altman等首次发明MHC/多肽四聚体方法并应用于检测可识别HIV抗原肽的特异性CTLs，获得成功。后经Walter等改进，成为检测和研究抗原特异性T细胞数量和功能的新技术。
可溶性MHC/多肽四聚体方法敏感性高，克服了传统方法的局限性，可用于各种抗原特异性T细胞表型分析、分离和克隆化，也可用于检测抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞数量，为研究与细胞免疫反应有关的一系列工作提供了高效、快速、敏感的研究手段。
【基本原理】
将体外表达的MHC重、轻链分子及短肽共孵育，使其折叠成正确的构象，形成MHC/多肽复合体，再经过纯化，并借助于半胱氨酸的巯基与生物素结合，然后将一个标记荧光的链亲合素与4个生物素标记的MHC-肽复合体结合形成四聚体。这种MHC/多肽四聚体与抗原特异性T细胞上的TCR结合后，即可通过灵敏度很高的流式细胞仪（FACS）进行检测。
【试剂及材料】
（1） 荧光素标记的MHC-肽四聚体：用含1%FCS，pH7.4 PBS配成 2mg/ml溶液。（2） PBMC或CTLs细胞克隆
（3） 洗涤液：含1%FCS，pH7.4 PBS。
（4） 固定液:25%戊二醛3.2ml，葡萄糖2g加无BSA的细胞洗液至100ml。
（5） 流式细胞仪
【操作方法】
（1） 于各实验管中分别加入106 PBMC或CTLs细胞克隆，1500r/min离心3min，弃上清；
（2） 分别加入荧光素标记的MHC-肽四聚体 50ml，混匀；
（3） 4℃孵育60min， 加入细胞洗液 ， 1500r/min离心3min，反复洗涤3次；
（4） 用细胞洗液恢复体积至0.5ml，加入固定液20ml，混匀；
（5） 上机检测。
