溶血与凝聚检查法 实验指导
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药理学实验
溶血与凝聚检查法
【目的】
学习溶血性试验的基本操作方法。
【原理】 溶血系指红细胞破裂、溶解的一种现象。多种中草药(如人参、桔梗、远志和甘草等)含有皂甙,可引起溶血。为了保证用药安全,以中草药制成的注射剂(特别是供静脉注射者)应考虑作溶血检查。
【器材】 离心机、 离心管 、小烧杯、竹签或玻棒(去纤维蛋白用)、 试管 、 试管 架、吸管、恒温箱或恒温 水浴 锅等。
【药品】 5%桔梗溶液、生理盐水(NS)、蒸馏水
【方法】按《中华人民共和国药典》2005年版附录118页进行。
1.2%红细胞混悬液的制备 取新鲜兔或羊全血数毫升(约20ml),加入含玻璃珠的锥形瓶中振摇10分钟,或用玻璃搅动血液,除去纤维蛋白,使成脱纤血液。
加入0.9%氯化钠溶液约10倍量,摇匀,以每分钟1500~2000转离心5分钟,除去上清液,沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2~3次,至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2%的红细胞混悬液,供实验用。
2.供试品溶液的制备 除另有规定外,临床用于非血管内给药的注射剂,
以各药品使用说明书规定的临床使用浓度,用0.9%氯化钠溶液1:3稀释后作为供试品溶液。
3.检查法 取洁净试管5支,编号,1、2号管为供试品管,3号管为阴性对照管,4号管为阳性对照管,5号管为供试品对照管。按下表所示依次加入2%红细胞混悬液、0.9%氯化钠溶液或蒸馏水,混匀后,立即置37±0.5℃的恒温箱或 水浴 中进行温育3小时后观察溶血和凝聚反应。将结果填入表13。
表 13 溶血性检查结果
试 管 编 号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
2%红细胞混悬液(ml) 0.9%氯化钠溶液(ml) 蒸馏 水( ml) 供试品溶液( ml) |
2.5 2.2
0.3 |
2.5 2.2
0.3 |
2.5 2.5
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2.5
2.5
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4.7
0.3 |
结 果 |
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注:“ +”表示溶血或凝聚,“-”表示不溶血或不凝聚,“±”表示部分溶血或凝聚
如实验中的溶液呈澄明红色,管底无细胞残留或有少量红细胞残留,表明有溶血发生;如红细胞全部下沉,上清液无色澄明,或上清液虽有色澄明,但1号管和5号管比色无明显差异,则表明无溶血发生。
若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀,振摇后不分散,表明有红细胞凝聚发生。如有红细胞凝聚的现象,可按下法进一步判断是凝聚还是假凝聚。
若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散,或将凝聚物置于载玻片上,在载玻片边缘滴加2滴0.9%氯化钠溶液,置显微镜下观察,凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚,若凝聚物不被摇散或载玻片上不被冲散者为凝聚。
【结果判断】 当阴性对照管无溶血和凝聚发生,阳性对照管有溶血发生时,若供试品管中的溶液在3小时内不发生溶血和凝聚,判供试品符合规定;若供试品管中的溶液在3小时内发生溶血和(或)凝聚,判供试品不符合规定.
【注意】
1.兔心脏取血法,背位固定,消毒皮肤,用8或9号针头,20ml注射器(消毒﹑干燥),在心脏搏动最明显处作穿刺,针头感到心脏跳动时,再将针头刺进心脏,取血后,迅速将针头拔出,这样心肌上的穿孔较易闭合。
2.加液顺序:RBC混悬液→供试品。
3.阳性对照品: 蒸馏 水。
【思考题】
与药物有关的哪些因素可以引起溶血现象?如何进行溶血性试
验?