原理
PNH患者的红细胞由于本身有缺陷,对补体敏感性增高,在酸化的正常血清中,(PH6.0-6.8)经37℃孵育,易破坏溶血.此法较敏感,假阳性少。
材料与仪器
末梢血
HCl NaCI溶液
离心管
HCl NaCI溶液
离心管
步骤
一、 实验试剂:
1. O.2mol/L HCI
2. 8.5g/L NaCI溶液
二、 实验操作:
l. 用 10ml离心管1支,加8.5g/L NaCI溶液5-6ml,再加患者末梢血10余滴.混匀,离心奔去上清液。如此重复洗涤红细胞2次,最后配成50%红细胞悬液.
2. 取与患者同型或AB型血3-5ml,待其自然凝固,分离,正常人血清(最好采用多人混合新鲜血清,以保证有足够补体).
3. 将上述同一正常人血按操作“l”制备 50%红细胞悬液,作正常对照按表操作.
4. 置37℃水浴中l小时,观察结果
5. 实验结果判断:
(1)试验管溶血对照管不溶血为阳性。
(2)试验管和对照管都不溶血为阴性。
1. O.2mol/L HCI
2. 8.5g/L NaCI溶液
二、 实验操作:
l. 用 10ml离心管1支,加8.5g/L NaCI溶液5-6ml,再加患者末梢血10余滴.混匀,离心奔去上清液。如此重复洗涤红细胞2次,最后配成50%红细胞悬液.
2. 取与患者同型或AB型血3-5ml,待其自然凝固,分离,正常人血清(最好采用多人混合新鲜血清,以保证有足够补体).
3. 将上述同一正常人血按操作“l”制备 50%红细胞悬液,作正常对照按表操作.
4. 置37℃水浴中l小时,观察结果
5. 实验结果判断:
(1)试验管溶血对照管不溶血为阳性。
(2)试验管和对照管都不溶血为阴性。
注意事项
1. 血清酸化后.试管必须塞紧,否则二氧化碳逸出.可使血清酸度下降.
2.抗凝剂会影响PH值,故不宜用抗凝血清.但可用脱纤维血.
3. 为了保证补体充足,最好用混合血清,但正常对照红细胞必须用“O”型.
4. 如患者曾经多次输血,血中异常红细胞相对减少.本试验可为弱阳性或阴性.
2.抗凝剂会影响PH值,故不宜用抗凝血清.但可用脱纤维血.
3. 为了保证补体充足,最好用混合血清,但正常对照红细胞必须用“O”型.
4. 如患者曾经多次输血,血中异常红细胞相对减少.本试验可为弱阳性或阴性.
来源:丁香实验