碱性磷酸酶钙―钴法

磷酸酶(phosphatase)是水解磷酸酯酶的总称。磷酸酶不仅参与磷酸酯化合物的水解反应。而且也参与其逆反应及磷酸转移反应。

1．碱性磷酸酶 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)在碱性环境下可催化各种酚和醇的磷酸酯水解，还具有磷酸转移作用，在细胞膜上运输作用较为活跃，如肾近端小管的刷状缘、小肠上皮的微绒毛、肝脏的胆小管、毛细血管内皮细胞及神经元的突触膜均可显示此酶活性。

碱性磷酸酶钙-钴法反应原理

1)孵育液配制

2％氯化钙 20ml

2％巴比妥钠 10ml

3％β甘油磷酸钠 10ml

5％硫酸镁 5ml

蒸馏水 5ml

孵育液最终pH 9．4,置于冰箱内保存。

2)染色程序：

①新鲜组织恒冷箱切片(可用10％福尔马林固定10分钟，或不固定)；

②人孵育液，37C~孵育10分钟(肾)至 60分钟(肝)；

③流水冲洗；分钟；

④人2％硝酸钴溶液2分钟；

⑤蒸馏水浸洗；

⑥人1％硫化铵溶液内1分钟；

⑦蒸馏水洗；

⑧甘油明胶封固。

3)结果与评价：酶活性部位显示棕黑色为硫化钴沉淀。该法的反应产物可发生扩散，定位欠准确，应加以注意。

碱性磷酸酶钙-钴染色