Percoll密度梯度离心法分离嗜碱性粒细胞

正常人血液中，嗜碱性粒细胞是数量最少的一种白细胞（2.8×104 /ml），因此也是最难分离、提纯的一种细胞。目前仍然用密度梯度离心法分离嗜碱性粒细胞。

试剂及配制

1. 无Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液

2. Percoll混悬液：取购买的Percoll(Pharmacia)90ml，HBSS 9ml，HEPES（0.25mol/L,pH7.3）1ml，HCl(1mol/L)0.4ml混合，调节pH7.4。

3. Percoll密度梯度离心管配制：

A液：Percoll 混悬液23.0ml，加HBSS 10.0ml（比重1.088）

B液：Percoll混悬液27.0ml，加HBSS 15.9ml（比重 1.079）

C液：Percoll混悬液 24.0ml，加HBSS 20.0ml（比重1.070）

在离心管中依次加入4ml A液、4ml B液、3mlC 液，制成3个密度梯度（上述分层液在临用前配制，同时应小心，不使各层混合）。

操作方法

1. 将新鲜的抗凝血（用0.1mol/L ，pH7.7 EDTA抗凝）按等体积加于Percoll密度梯度分层液上，室温下离心，1200r/min，25min；

2. 将每一层细胞分别吸出，各放入1只试管内，加无Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液在4℃下洗涤3次，每次1200r/min离心10min，弃上清；

3. 将分别得到的各层细胞涂片，固定后用Wright-Giemsa 染液染色。在显微镜下检查嗜碱性粒细胞（大多数嗜碱性粒细胞在中间层，但不同个体嗜碱性粒细胞的比重不同，因此可能会出现在其他细胞层）。嗜碱性粒细胞染成暗紫红色。

~undefined_用此法分离的嗜碱性粒细胞中含淋巴细胞数量小于2%，不含红细胞。方法简便，重复性好。