C3裂解产物（C3SP）C3a的定量检测

C3是补体二条激活途径的关键分子，C3活化后裂解为C3a、C3b两个片段，C3a很快被血清羧肽酶N裂解为C3adesarg，C3b被H、I因子灭活为C3bi，经蛋白酶水解为C3c、C3d、C3dg等，检测这些裂解产物即可反映C3的活化程度。

C3a的定量检测采用竞争性抑制放射免疫法。其原理为用“I标记C3（I-C3）”与待测样本、兔抗人C3a多克隆抗体一起孵育，待测样本中的C3a（未标记抗原）能竞争性地与抗C3a结合，使C3a复合物（B）增多，而“I-C3”游离出来（F），根据B%来判断待测样本中C3a的含量。

1、样本的采集 EDTA抗凝血浆（EDTA终浓度为l0mmol），2000r/min离心10rain，等量分装，置-70℃保存待检。

2、标记抗原的制备 用氯胺T法以125I标记C3纯品，制成125I-C3。

3、标记抗原（125I-C3）、兔抗人C3a复合物的制备 取1sCNBr活化的Sepharose4B偶联I00uL不同稀释度兔抗人C3a血清，Sepharose 4B用含有10mmol EDTA、0.3%（W/V）Tween 20pH7.4PBS（PBS-ET）浸泡，加入PBS-ET稀释的125I-C3 （大约1500cpm）50/uL，室温16h，反应在2mL聚苯乙烯试管中进行。次日用生理盐水洗4次，然后测定Sepharose4B放射活性B%。125I-C3与抗C3a-Sepharose4B的最大结合率为90%。

4、待测样本中C3a的检测 将EDTA抗凝血浆或血清与等体积含22%（W/V）PEG的0.1mol/L，pH8.3硼酸盐缓冲液混合，0℃孵育60rain，2000r/min离心30min，取上清。选择上述125I-C3抗C3a复合物50%结合率所需的抗C3a血清稀释液，取0.5mL加入50/uLPEG沉淀的上清和50/uL125I-C3，室温16h，用生理盐水洗涤4次，计算Sepharose4B的放射活性（B%）。

5、标准曲线的绘制 将新鲜血清于37℃放置7d（normal senlinaged，NSA），血清中含0.02%（W/V）NaN3。以NSA作为C3a放射免疫分析法（RIA）的标准品。NSA中C3a的浓度为60ug/mL，可将NSA作不同浓度的稀释，50/uL1：10000稀释的NSA足够抑制“I-C3”与抗C3a-Sepharose4B的结合。然后以B%为纵坐标，不同稀释度标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。本法最低检测限为0.66nmol/L，正常值为1.55±0.87nmol/L（X±1SD）。