组织肥大细胞的分离

肥大细胞不存在于循环血液中，需从有关组织如胃肠道和肺组织中获取，下面介绍从胃肠道组织中用机戒破碎，酶消化后获得肥大细胞的方法。

[材料和试剂]

(1)肠片段3～5g

(2)含5%NCS的HBSS

(3)0.9%生理盐水

(4)含20%NCS和1ug/ml胶原酶的HBSS

(5)含20%NCS和0.5ug/ml胶原酶的HBSS

(6)含0.13mmolEDTA的HBSS(HBSS/ETDA)

(7)用HBSS配成50mmol/LN-乙酰基-L-半胱氨酸。

[操作方法]

(1)切取小块组织，置于装有20ml(2)液的培养皿中；用剪刀去掉组织块上肠系膜及脂肪；室温下将组织块放入装有(3)液的烧杯内轻轻晃动，洗去组织上附着的杂物。弃掉液体后洗3次，然后用剪刀将组织块剪成小于0.3cm3的小块；

(2)将剪碎的组织块放入装有以下预温的液体内，37℃下轻轻拨动，洗涤；先放(6)液内洗涤2次，每次5min，再放(7)液洗涤1次，1min后，最后放(2)液内洗2次，每次10min；

(3)弃掉最后的洗涤液，并用剪刀将组织块剪成1mm3的碎块分别放入几个培养皿内；

(4)加入(4)液25ml，放37℃，轻轻搅动下作用90min；

(5)将上述液体加入50ml离心管内，4℃，1000r/min离心10min，弃上清；加入(2)液，放入冰浴中保存；

(6)在剩余的组织碎片内加入(5)液25ml，继续作用60min。然后用注射器反复抽吸，使组织碎片散开，用网状海绵过滤，获得肥大细胞；

(7)将上两次获得的细胞悬液合并，4℃，1000r/min离心10min，弃上清；

(8)加5ml(2)后，用5ml聚酰胺纤维柱滤去碎片及细胞团块，再加5ml(2)液洗涤该柱。加上前一次的洗涤大约共的8～9ml细胞悬液。将此悬液4℃，1000r/min离心10min，弃上清，加少许(2)液，放入冰浴中备用；

(9)用甲苯胺蓝染色后，计数肥大细胞的百分比。正常人：1×104～2×104细胞/mm3。