（请教）肝组织的VEGF免疫组化方法

本人刚开始做实验，杳看了一些资料，准备用以下两种方法中一种进行实验，请大家指教，看看具体条件行不行，有什么要改进的地方，谢谢！！！

方法一：

1、 白片(石蜡切片)放于处理好的载玻片上，烤片60度1h（此载玻片未经粘片剂处理）

2、 二甲苯5min *3

3、 异丙醇5min *3

4、 乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3mi

5、 双蒸水洗3miundefined3

6、 丙酮洗3 次

7、 APES胶立式染缸1-3min

8、 丙酮洗

9、 双蒸水冲3次

10、 PBS洗5min

11、 3%双氧水10-15min

12、 PBS洗5min

13、 抗原修复（微波加热法）

14、 PBS冲5miundefined3次

15、 非免疫性动物血清50ul封闭

16、 甩去血清，加入50ul一抗，室温下60mi

17、 PBS冲洗5miundefined3次

18、 加入50ul二抗，室温下20min

19、 PBS冲5miundefined3次

20、 ABC复合物50ul，室温下20-30min

21、 PBS冲5miundefined3次

22、 DAB显色液3-10min

23、 双蒸水洗1miundefined2次

24、 苏木素复染0.5-1mi

25、 自来水洗30min

26、 封片

方法二：

1、 白片放于处理好的载玻片上，烤片60度5d (此载玻片经粘片剂APES处理)

2、 二甲苯5min *3

3、 异丙醇5min *3

4、 乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min

5、 双蒸水洗3miundefined3

6、 双氧水10-15min

7、 PBS洗5min

8、 抗原修复（微波加热法）

9、 PBS冲5miundefined3次

10、 非免疫性动物血清50ul封闭

11、 甩去血清，加入50ul一抗，室温下60min

12、 PBS冲洗5miundefined3次

13、 加入50ul二抗，室温下20min

14、 PBS冲5miundefined3次

15、 ABC复合物50ul，室温下20-30min

16、 PBS冲5miundefined3次

17、 DAB显色液3-10min

18、 双蒸水洗1miundefined2次

19、 苏木素复染0.5-1min

20、 自来水洗30min

21、 封片

抗原修复用微波加热法：

1、0.01M柠檬酸—柠檬酸盐缓冲液放入微波炉内加热至沸腾

2、脱蜡水化后组织置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，再中档继续处理15min

3、取出波炉盒，室温放置20min

4、取出切片架，用PBS冲洗3次，后滴加50ul非免疫性动物血清