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从普通琼脂糖凝胶电泳中用玻璃奶回收DNA段

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2355

实验步骤:

1、待回收的DNA段经电泳分离后,从琼脂糖凝胶上切下所需DNA段,放在1.5ml EP管中;

2、加入3 倍(请准确估量凝胶的体积)体积的溶胶液(以100μl 体积胶加入300μl 溶胶液为一次标准反应),室温下放置5分钟或50℃ 保温3分钟,其间轻摇EP管几次使胶完全融化;

3、加入10μl玻璃奶(玻璃奶使用前请充分摇匀),颠倒混匀,冰浴下放置10分钟。每隔2~3分钟混匀一次,12000rpm离心30秒,吸弃上清;

4、加250μl漂洗液(浓缩漂洗液使用前,按浓缩漂洗液:无水乙醇= 3:7配制成工作浓度),用加样器吹打漂洗液,轻柔地将玻璃奶悬浮混匀,12000rpm离心30 秒,吸弃上清;

5、重复步骤4(尽量吸尽漂洗液)。吸取完漂洗液后再离心10秒钟,用Tip头将最后一点儿漂洗液吸干净。然后,放置于37℃烘箱干燥直至沉淀呈白色,约15~20分钟;

6、加适量洗脱缓冲液即无菌水(20μl为一次标准反应),混匀,60℃水浴5分钟,12000rpm离心1分钟,回收上清备用。重复步骤6,能提高回收率。

7、同原质粒一起琼脂糖凝胶电泳鉴定回收片段。根据亮度可以估计回收的量。

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