丝状噬菌体的生活史
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野生型Pf类丝状噬菌体只能感染带有F性菌毛的雄性大肠杆菌。
当噬菌体感染大肠杆菌时,先通过其头部的pⅢ蛋白N端吸附于大肠杆菌F性菌毛的末端,脱去主要衣壳蛋白pⅧ,其感染性单链DNA则进入宿主细胞细菌,并在10~15min内,首先在宿主胞内酶的作用下,以此环状单链的DNA为正链,通过滚环复制拷贝出互补的负链DNA,形成环状双链DiNA分子即复制型DNA(RFDNA)。这种双链DNA分离纯化后可作为双链DNA载体。
当宿主细胞内RFDNA积累到100~200个拷贝后,则开始转录和复制,并产生所有的病毒蛋白。
先由pⅡ在RFDNA正链的特定复制起始位点(ori+ )上产生一个切口,以负链作为模板,通过滚环复制产生出大量单链正链DNA,再由pⅡ将其连接形成环状单链,同时与pV蛋白结合后抑制其再转化成RFDNA,而成为子代DNA。
噬菌体的组装并不在宿主细胞质内进行,包裹噬菌体的5种结构蛋白合成后都插在大肠杆菌的内膜上,其C末端位于细胞质中,而N末端在细胞周质腔中,周质腔中的氧化环境有利于蛋白质折叠。其中pⅢ和pⅧ蛋白其N端带有信号肽,但在组装病毒颗粒之前必须去除信号肽而成为成熟蛋白。
噬菌体在装配前,新合成的DNA先由pV蛋白包裹,被输送至宿主细胞的细胞膜附近。在这里pV蛋白被预先合成并锚定在细胞膜上的主要衣壳蛋白pⅧ所取代,包裹成完整的病毒粒子。