血浆清蛋白的分离纯化与鉴定
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1.饱和硫酸溶液:称固体硫酸铵85g于100ml蒸馏水中,在70~80℃水浴中搅拌溶解,用浓氨水调PH为7.2,室温放置过夜,瓶底析出白色结晶,上
层液即为饱和硫酸铵液。
2.生理盐水:称取分析纯NaCl 0.89克,蒸馏水稀释至1000ml.
3.葡聚糖凝胶Sephadex G-25: 称取10克Sephadex G-25,加入200ml 0.02mol/lPH6.5磷酸盐缓冲液溶胀24小时。
6.pH8.6,离子强度0.06巴比妥电极缓冲液:称取巴比妥钠12.76g,巴比妥1.66g,蒸馏水加热溶解后再加水至1000ml。
7.氨基黑10B染色液:称取氨基黑10B 0.5g,用甲醇50ml,冰醋酸10ml,蒸馏水40ml溶解。
8.漂洗液:95%乙醇45ml,加冰醋酸5ml及蒸馏水50ml。
(1)装柱:取层析柱(1×20cm),关紧下端出口,加蒸馏水少许,缓慢加已膨胀的葡聚糖凝胶G-25悬液,至凝胶沉淀10~15cm高,注意凝胶床表面应平整。
(4) 继续用蒸馏水洗柱,流出液用1%BaCl液检测,直至无白色沉淀出现后,洗柱完毕,关闭出口。
(1)取2×8cm大小的醋酸纤维薄膜2张,于巴比妥缓冲液中充分浸湿。将浸湿的膜条取出后用滤纸吸去多余的水分,于无光泽面点样。
(2)在距离膜条一端约1.5cm处,用X光软片蘸取全血清和纯化的清蛋白样品液分别点于两张膜条上。
(3)将巴比妥电极缓冲液加于电泳槽内,再将点样后的膜条放置于电泳槽架上,槽架上用四层滤纸作桥垫。放置时膜条的无光泽面应向下,点样端置于阴极,膜条与滤纸面贴紧。