原理
鸡血浆为最早用于培养的液体,含有纤维蛋白原和一定的营养成分,当与鸡胚胎汁混合后,能发生凝固,构成细胞生长的环境,利于细胞向三维空间生长,缺点是易于液化。因制备血浆后不再做无菌处理,全过程必须在严密无菌条件下进行。
材料与仪器
雄鸡
肝素 生理盐水 酒精
手术架 棉球 注射器 离心机
肝素 生理盐水 酒精
手术架 棉球 注射器 离心机
步骤
利用生长一年左右体大、健壮的雄鸡,采血压计前一天禁食,多喂水。
制备方法如下:
2. 动物准备
缚鸡于手术架上,令仰卧,从鸡翅取血;展开鸡翅,拔除翅根局部羽毛,选血管粗大部位,碘酒和酒精棉球消毒;
3. 采血
取20 ml 无菌注射器,先吸入肝素液少许,湿润注射器内壁后,用16号针头刺入静脉,吸血10 ml,立即注入离心管中,摇匀;
4. 分离血浆
3000 转/分 离心10 分钟后吸出上清血浆,分装入小瓶中,-20 ℃冰箱贮存备用。
也可采用从鸡的心脏穿刺取血,方法是从锁骨上窝部进针,直接穿入心脏;取血量大而快,用此法采血亦可。
制备方法如下:
1. 肝素溶液制备
配制浓度20 mg/100ml 生理盐水肝素液,9 磅10 分钟高压或滤过灭菌,每小瓶中分装入0.5 ml 贮4 ℃冰箱中备用;
配制浓度20 mg/100ml 生理盐水肝素液,9 磅10 分钟高压或滤过灭菌,每小瓶中分装入0.5 ml 贮4 ℃冰箱中备用;
2. 动物准备
缚鸡于手术架上,令仰卧,从鸡翅取血;展开鸡翅,拔除翅根局部羽毛,选血管粗大部位,碘酒和酒精棉球消毒;
3. 采血
取20 ml 无菌注射器,先吸入肝素液少许,湿润注射器内壁后,用16号针头刺入静脉,吸血10 ml,立即注入离心管中,摇匀;
4. 分离血浆
3000 转/分 离心10 分钟后吸出上清血浆,分装入小瓶中,-20 ℃冰箱贮存备用。
也可采用从鸡的心脏穿刺取血,方法是从锁骨上窝部进针,直接穿入心脏;取血量大而快,用此法采血亦可。
来源:丁香实验