荧光辅助糖电泳的优化

摘要：

荧光辅助糖电泳（FACE）是一种快捷、花费少的分离糖类方法。寡糖首先经8-氨基萘-1，3，6-三磺酸（ANTS）胺化还原衍生，该反应过程在所给实验条件下需要16h。然后，经ANTS衍生的寡糖在ρ（丙烯酰胺）=0.32g/ml ρ（双丙烯酰胺）=0.024g/ml组成的碱性分离胶上电泳从而得以分离。该方法无需专门的仪器和操作熟练的技术人员。

寡糖有许多重要的生理功能，它在发育、免疫和癌转移等过程中起着很重要的作用。而糖蛋白能参与细胞的稳定和粘合、抗体的识别以及微生物的束缚等生理过程，并且在细胞表面识别方面有重要的作用。

寡糖混合物的分离和性质研究是糖类研究中的难点之一，其主要原因有：（1）糖分子缺乏生色基团或荧光基团，直接检测困难；（2）寡糖具有类似的化学组成，有多种可能的异构体，存在不同种连接方式和分支形式，结构异常复杂，分离难度很大。

虽然高灵敏度的气相色谱、液相色谱、质谱、核磁共振谱和毛细管电泳在糖类分析中已显示出优越性，但是上述糖类分析方法需要专门的仪器和操作熟练的技术人员。

荧光辅助糖电泳（fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis，FACE），也称为荧光标记糖的聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylami-de gel electrophoresis of fluorophore-labeled saccharides，PAGEFS），是一种简单、快捷的糖类分析方法，它无需专门的仪器和操作熟练的技术人员。

使用FACE分析糖类时，首先需要将糖预衍生。目前，有若干种已应用的衍生方法和相应的衍生试剂，其中8-氨基萘基-1，3，6-三磺酸（8-aminonaphthalene-1，3，6-trisuffonate，ANTS）应用较多。

ANTS衍生不仅为糖分子提供了生色（荧光）基团，还提供了3个负电荷，使原来中性的糖分子在各种pH的缓冲液中在电场力作用下产生电迁移，因此较适用于寡糖的分离。然后将衍生后的糖类进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）。

相对于蛋白质和DNA这些大分子而言，寡糖算是较小的分子。因此，必须使用较高浓度的凝胶，才能有效地分离寡糖。

本文报道了FACE分离寡糖的最佳方案，为寡糖的分离和分析提供了实验依据。