细胞转染后的筛选，如何配制培养液？

jw52317：细胞转染后的筛选，如何配制培养液？

最近打算将一cDNA转染到一肿瘤细胞内，所用的质粒（pCMV）只有氨苄西林的抗性基因（Amp），请问有哪位朋友知道我转染细胞后该怎么配制筛选培养液，包括选用的抗生素，浓度已经转染后什么时候开始筛选的等。

丁香园网友学山肥虎认为：

1 质粒的概念

质粒（plasmid）是独立于染色体外、具有自主复制能力的遗传单位，其本质是较小的核酸分子，大小范围在1kb-200kb以上不等。

2 质粒给宿主细胞的标记

（1）氨苄青霉素（Ampicillin ）

（2）卡那霉素（Kanamycin）

（3）四环素（Tetracycline）

（4）氯霉素（Chloramphenicol）

（5）链霉素（Streptomycin）

（6）潮霉素（Hygromycin

3 基因工程中的质粒载体

克隆载体（cloning vector）：

使目的片段能在细菌细胞中复制的载体；

表达载体（Expression Vector ）：

使目的基因能在细菌细胞表达为RNA或蛋白质的载体。

4 克隆载体必备条件

（1）具有复制起点

（2）具有抗菌素抗性基因

（3）具有若干限制酶单一识别位点

（4）具有较小的相对分子质量和较高的拷贝数。

5 表达载体的必备条件

（1）能自主复制

（2）具有方便、灵活的克隆位点和筛择标记

（3）具有能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别的强大启动子

（4）启动子应可受诱导调控

（5）具有强终止子

具有翻译起始信号

你的质粒没有真核筛选标志，不能用于真核细胞转染后筛选。