转染细胞后如何配制筛选培养液

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jw52317：细胞转染 后的筛选，如何配制培养液?

最近打算将一cDNA转染到一肿瘤细胞内，所用的质粒 (pCMV)只有氨苄西林的抗性基因(Amp)，请问有哪位朋友知道我转染细胞后该怎么配制筛选培养液，包括选用的抗生素，浓度已经转染后什么时候开始筛选的等。

学山肥虎认为：

1 质粒的概念

质粒(plasmid)是独立于染色体 外、具有自主复制能力的遗传单位，其本质是较小的核酸分子，大小范围在1kb-200kb以上不等。

2 质粒给宿主细胞的标记

(1)氨苄青霉素(Ampicillin )

(2)卡那霉素(Kanamycin)

(3)四环素(Tetracycline)

(4)氯霉素(Chloramphenicol)

(5)链霉素(Streptomycin)

(6)潮霉素(Hygromycin

3 基因工程中的质粒载体

克隆载体(cloning vector)：

使目的片段能在细菌细胞中复制的载体;

表达载体(Expression Vector )：

使目的基因能在细菌细胞表达为RNA或蛋白质的载体。

4 克隆载体必备条件

(1)具有复制起点

(2)具有抗菌素抗性基因

(3)具有若干限制酶单一识别位点

(4)具有较小的相对分子质量和较高的拷贝数。

5 表达载体的必备条件

(1)能自主复制

(2)具有方便、灵活的克隆位点和筛择标记

(3)具有能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别的强大启动子

(4)启动子应可受诱导调控

(5)具有强终止子

具有翻译起始信号

你的质粒没有真核筛选标志，不能用于真核细胞转染后筛选。