BrdU单克隆抗体的制备及鉴定

BrdU单克隆 抗体 的制备及鉴定 中华 微生物 学和免疫学杂志 1999年第3期第19卷 基础 免疫 学 作者：韩淑红邓鸿业徐志伟邓玉兰黄大无丁桂凤 单位：100083 北京医科大学免疫学系

DNA的5-溴,2’-脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记法近年来作为一种新的、简便、敏感特异的检测方法,在肿瘤生物学、遗传学、分子生物学特别是 细胞增殖 动力学等领域得到广泛应用,在一定程度推动了相关学科的发展.

为了满足广泛开展BrdU标记DNA检测对BrdU特异性 单抗 的需要,我们制备了一株产生BrdU单抗的杂交瘤 细胞株 .本文对此细胞株制备过程及单抗鉴定情况作了简单叙述.

　　由于BrdU是半抗原,需制备完全抗原BU-OVA进行免疫,BU-OVA的制备方法是过碘酸钠氧化法.BrdU单抗制备过程的关键是排除与胸腺嘧啶核苷(TdR)发生非特异交叉的抗体产生细胞,所以,还增加两种用于筛选的抗原即BU-BSA和MU-BSA,其制备方法同BU-OVA.

　　融合用的细胞为BALB/c小鼠 骨髓 瘤细胞系Sp2/0,BALB/c小鼠供免疫和诱发单抗腹水.按常规方法融合筛选一株与BrdU反应而与TdR无明显交叉反应的杂交瘤细胞株,经克隆化培养后命名为4F4.用这株细胞接种于小鼠腹腔可产生富含抗体的腹水,其抗体类型为IgG类,ELISA法测其效价在1∶5000以上,FACS分析时稀释度为

1∶400,BrdU体内和体外法参入,FACS分析结果表明4F4单抗与未参入有BrdU的DNA无明显交叉反应,并能很好反映参入BrdU的DNA含量的动态变化.半抗原竞争抑制实验表明4F4单抗对BrdU的特异性很高,而与TdR无明显结合现象.综合以上鉴定结果,4F4单抗的敏感性和特异性都很高.

此外,由于发生BrdU参入的细胞一定要经过细胞固定及DNA变性处理后才能用BrdU单抗作检测,但处理能够引起细胞凝聚及非特异吸附现象.所以,我们在实验中应用BrdU标记技术时注意克服了这些难点,使4F4细胞株产生的BrdU单抗在对BrdU参入细胞的检测中获得了准确而重复性高的结果.