淋巴细胞的分离

单核细胞和多核白细胞具有粘附在塑料或玻璃表面及吞噬羟基铁粉等特性，而淋巴细胞则不能，由此可将其从悬液中分离出来。

一、玻璃器皿吸附法

[操作方法]

1. 将分离的外周血单个核细胞（PBMC）悬液（2×106 /ml）倾入 玻璃平皿中，于37℃温箱静置30～40min，使单核细胞粘附与玻璃平皿上；

2. 用毛细吸管轻轻吸取未粘附的细胞悬液，即为除去单核细胞的淋巴细胞悬液。此法也可制备纯单核细胞。

二、玻璃纤维柱法

[操作方法]

1. 取抗凝血，倾入装有玻璃纤维的柱层中，置37℃温箱45min；

2. 用37℃预温的hanks液洗脱，收集洗脱下来的细胞；

3. 将收集的细胞用聚蔗糖-泛影葡胺分层液离心分离淋巴细胞。用本法既可除去血小板，又可将单核细胞减至2%以下，但仍含有一定数量的粒细胞。

三、磁铁吸引法

[试剂及配制]

1. Hanks液

2. 6%右旋糖酐生理盐水

[操作方法]

1. 取10ml用Hanks液稀释1倍的抗凝血加入试管加入试管，再加6%右旋糖酐生理盐水溶液3ml，羟基铁1g和3mm大小的玻璃株10粒，混匀，置摇动台上37℃旋转摇动10min；

2. 用磁铁在试管外将铁霄吸至管底，在将试管斜放450 ，经37℃ 20min，吸取上清，即为除去单核细胞的淋巴细胞。

四、羟基铁-乳胶分层液法

[试剂及配置]

1. 5%右旋糖酐

2. 1%羟基铁Hanks 液

3. 0.6μm大小的乳胶颗粒悬液

[操作方法]

1. 将5%右旋糖酐4ml与抗凝血20ml混匀，置室温30min使红细胞沉降；

2. 移出富含白细胞的血浆层，将之与等体积的1%羟基铁Hanks液混合，并加一滴0.6μm大小的乳胶颗粒悬液；

3. 将试管放37℃摇台上摇1h，再将混合液用聚蔗糖-泛影葡胺分层液离心分离，吞噬铁末和乳胶的单核细胞比重较高，多沉于管底，所得淋巴细胞纯度可达到94%～95%。