乙肝防治研究进展

北京蛋白质组研究中心/蛋白质组学国家重点实验室姜颖副研究员课题组刘坤博士等发现乙型肝炎病毒相关疾病治疗的潜在靶点，相关论文发表在最新一期国际蛋白质组学权威杂志：《分子与细胞蛋白质组学》（Molecular & Cellular Proteomics, MCP）上面，同期杂志还发表了该所朱云平研究员课题组、钱小红研究员课题组的两篇研究论文，创该刊单期同一单位发文数之最。

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一种严重危害人类健康的重大疾病，目前治疗手段有限，其重要原因是缺乏有效的治疗靶点。他们用先进的蛋白质复合体分离和鉴定方法，发现热休克蛋白HSP90 和HSP70/HSP60形成的内源性分子伴侣复合体参与了HBV的复制及分泌，并用RNAi和小分子抑制剂证明它们可作为治疗HBV相关疾病的潜在靶点。此研究结果为系统了解HBV的生命周期及研发相关疾病的治疗药物提供了新的思路。

Molecular & Cellular Proteomics 8:495-505, 2009.doi:10.1074/mcp.M800250-MCP200

Two-dimensional Blue Native/SDS-PAGE Analysis Reveals Heat Shock Protein Chaperone Machinery Involved in Hepatitis B Virus Production in HepG2.2.15 Cells

香港玛丽女王医院进行的研究显示，以慢性乙肝患者的性别、年龄、乙肝病毒(HBV)DNA水平、核启动子突变和肝硬化等为基础的评分系统(GAGHCC)，可有效预测患者5年和10年的肝细胞肝癌(HCC)发生危险。该研究发表于《肝脏病学杂志》(Journal of Hepatology 2009，50:80)。

820例慢性乙肝患者接受的平均为期76.8个月的随访显示，经组织学或甲胎蛋白联合影像学检查证实的5年和10年HCC患病率分别为4.4%和6.3%。

多因素分析显示，男性[相对危险(RR)为2.98，P=0.025]、年龄增加(RR=1.07，P< 0.001)、HBV DNA水平高(RR=1.28，P=0.02)、核启动子突变(RR=3.66，P=0.007)及存在肝硬化(RR=7.31，P< 0.001)是发生HCC的独立危险因素。

综合上述因素建立一个评分系统(并在验证人群中验证)预测HCC 5年和10年发生危险的敏感性>84%，特异性>76%，5年和10年预测的曲线下面积分别为0.88和0.98。评分临界点为101分，如果患者评分超过101分，其HCC危险将呈指数级升高。

该评分系统可用于甄别哪些是需要筛查和治疗的高危慢性乙肝患者。

美国国立卫生研究院科赫(Koh)和梁(Liang)认为，香港这项长达10年的研究建立了一个有效的HCC 5年和10年发病危险预测评分系统，该系统有助于HCC高危人群的识别。

但该研究还存在一些不足，如研究中仅40例患者最终患HCC，这对该评分系统有一定影响。另外，该研究所纳入的均为中国人，因此，该评分系统是否适用于其他种族的人群尚待研究。

Journal of Hepatology，doi:10.1016/j.jhep.2008.07.023 ，Man-Fung Yuen，Ching-Lung Lai

Independent risk factors and predictive score for the development of hepatocellular carcinoma in chronic hepatitis B

来自西班牙国立癌症研究中心等处的科研工作者在冷泉港出版社的Genome Research上发表文章，解析病毒的表观遗传学变异对癌症发生的关系，为病毒致癌理论增添了新的内容。

目前，科学家们发现有15%的癌症与病毒感染有直接的关联，比如说，子宫癌就与HPV有直接的关系。

在这篇研究性文章中，科学家们进一步发现癌症的发生与病毒DNA的甲基化有某些密切的关联。DNA甲基化可能导致基因沉默，而某些基因的沉默又与癌症的发生有关联。

Manel Esteller带领研究小组绘制了三种致癌病毒的甲基化图谱，分别是HPV（人乳头状瘤病毒），HBV（乙肝病毒）和EBV。

每种病毒又分别在三种阶段来绘制甲基化图谱，一种是病毒侵入细胞还不致病的早期，一种是病毒侵入细胞引发早期癌症症状的时期，一种是病毒侵入细胞已经引发恶性癌症的晚期。研究者发现，癌症症状越严重病毒的甲基化程度越深。

对于这一结果，研究人员Esteller推测，病毒面对宿主的免疫攻击后衍生出新的逃避免疫攻击的机制，病毒通过甲基化沉默掉部分基因，减少蛋白的表达量，越少蛋白表达就越少刺激宿主的免疫系统，病毒就以此来逃避免疫攻击。

研究人员称，下一步将研究其他病毒的甲基化机制，比如说HIV的甲基化与免疫逃避的关联。

Genome Res. 2009.Published in Advance February 10, 2009, doi:10.1101/gr.083550.108

The dynamic DNA methylomes of double-stranded DNA viruses associated with human cancer

《肝脏学》(Hepatology 2009, Vol. 49, No.1, p60-71)杂志发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所赵慕钧研究组的最新研究发现：即乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)调控beclin 1基因表达从而影响饥饿诱导的细胞自吞噬(autophagy)。

乙肝病毒(HBV)感染不仅可引起急、慢性肝炎, 而且与肝硬化、肝癌的发生密切相关。在HBV编码的蛋白中，乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)被认为是参与慢性乙型肝炎病理过程和诱发肝癌的最重要的蛋白质。乙肝病毒X蛋白间接调控宿主细胞内许多基因的转录，广泛影响宿主细胞的各种生命活动，包括调节细胞凋亡，抑制细胞DNA的修复，干扰细胞有丝分裂和细胞周期进程等等。

赵慕钧研究组的唐红博士生等多人参与研究，发现了HBx的一个新功能----调节宿主细胞的自吞噬。自吞噬是细胞通过自我降解细胞器和生物大分子等从而产生核苷，氨基酸和脂肪酸的循环利用过程，可以在营养物质缺乏时维持细胞生存。

人beclin 1基因是哺乳动物中第一个被发现的诱导自吞噬的基因。该研究组发现beclin 1基因在HBV阳性肝癌组织中表达升高，当他们将HBx导入肝和肝癌细胞发现可以提高细胞内源Beclin 1的表达水平。

然后，他们鉴定了beclin 1基因启动子，证明HBx可增强beclin 1启动子活性，提高胞内Beclin 1蛋白质水平。Beclin 1是自吞噬的关键分子之一，它与ClassⅢ PI3K结合形成复合物，促进早期自吞体膜结构的形成。

进一步的工作证明HBx通过上调Beclin 1的表达，增强了细胞对饥饿引起的自吞噬的敏感性。在对HBV阳性肝细胞的研究中也发现，HBV感染增强了宿主细胞的自吞噬，而这一作用正是HBx依赖的。上述研究结果提示了HBV感染的肝细胞在饥饿环境下一种可能的生存机制，为研究HBV感染与肝癌发生发展提供了新的思路。

这项工作受到了国家863项目(2006AA02Z190和2002AA711A02)的经费资助。

Hepatology Volume 49 Issue 1, Pages 60 - 71 14 Aug 2008

Hepatitis B virus X protein sensitizes cells to starvation-induced autophagy via up-regulation of beclin 1 expression

当前中国可能有近百万接受抗病毒治疗的患者，然而很多患者仍然无法做到规范治疗。有些患者或因为忙于公事而漏服药，或因为各项指标正常了，自认为感觉好了就自行决定不再服药。

除此之外，许多患者同样无法坚持每三个月定期去医院监测各项指标，殊不知定期监测不仅能了解自己的病情更能帮助医生及时调整治疗方案。我国《慢性乙型肝炎防治指南》明确指出，e抗原阳性的乙肝患者（俗称“大三阳”）口服抗病毒治疗药物(如核苷类似物药物)应该坚持至少2年，而e抗原阴性的患者（俗称“小三阳”）则应坚持治疗至少2年半。但是多数患者无法坚持2年。

中国工程院院士、北京大学医学部庄辉院士指出，不能坚持规范的抗病毒治疗方案，不仅达不到治疗效果，还可能引发病毒变异，不但不能控制病情，还可能加速疾病恶化。

不规范抗病毒治疗现象在接受口服抗病毒治疗药物(如核苷类似物药物)的患者中尤其普遍。当前在中国已有多种口服抗病毒治疗药物，有些价格不菲，使用一年的费用要一万五千元，但也有药物因在中国应用多年，已进入国家医药报销目录，而且在多个城市已进入门诊特保目录。

有些患者认为贵的药疗效更强，只选择贵的药物服用但却不能坚持2年的用药时间。专家指出，这些药物虽然各有千秋，但都能有效抑制乙肝病毒，患者应根据自身的经济情况，选择能够坚持支付至少2-3年的口服抗病毒治疗药物。对于抗病毒治疗，“坚持”和“规范”与“快速”和“强效”同等重要。

　　通过对慢性乙型肝炎病毒携带者不同的地域、年龄、性别、体质以及有关实验室检查、肝脏组织学研究，获得乙肝病毒携带在中医方面的研究成果，从而认识乙肝病毒的基本规律，寻找到有效的中医治疗方法——昨天，一项由深圳市中医院申报的“慢性乙肝病毒携带者的征候规律研究”科研项目正式被卫生部以及解放军总后勤部卫生部联合列为《国家中长期科研技术发展规划》的16个项目之一，并获得2000万元的专题总经费。这是该项目第一次落户深圳。

课题的通过，标志着我市在中医研究领域迈向了一个新台阶。

　　据悉，获得该项目支持的深圳中医院肝病科是全国重点专科，目前有博士生导师2人，硕士生导师3人，曾经先后主持完成或者正在研究国家自然科学基金项目3项，国家中医药管理局课题项目4项，广东省自然科学基金项目1项，深圳科技局等国家重大科技项目20余项。

针对当前众多乙肝患者无法坚持长期规范的乙肝抗病毒治疗的问题，中国肝炎防治基金会日前启动了“百家医院与你同行，百万患者共抗乙肝”项目，同时肝基会联合中华医学会肝病学分会率先在全国40家医院发起“乙肝患者抗病毒治疗依从性调查”,并开通中国抗病毒治疗乙肝患者支持热线（800-820-5195 和400-820-5195）。

肝基会副理事长王钊教授介绍，“调查”将在4月至5月内覆盖一万名乙肝患者，旨在深入了解患者无法长期坚持规范抗病毒治疗的原因，这是我国最大规模的一次针对乙肝患者口服抗病毒治疗现状的调查。乙肝患者支持热线也将借助医院专家的力量，为每一位接受抗病毒治疗的患者制订定期监测计划，并通过热线电话的方式对患者长期规范用药进行督促和跟踪，每一位已接受抗病毒治疗的乙肝患者均可拨打此热线报名参加。

　　通过四十八周的长效干扰素α-2a治疗后，产生免疫应答的乙肝患者有百分之八十以上在治疗停止后的一到二年里能实现持续应答，且疗效稳固。这表明患者可通过短期疗程，获得长期的最佳临床获益，从而无须再依赖药物，恢复健康的生活。

　　作为第三军医大学西南医院感染病科的临床主任，王宇明指出，中国的乙肝药品种类繁多，各个医院针对不同类型的患者有着不同的治疗方案。

如何让患者通过正确抗病毒治疗方案达到最高治疗获益，目前还存在许多误区：认为对付乙肝还没有特效药，治不治都一样，丧失治疗信心；认为转氨酶代表肝功能，治疗只要转氨酶正常就好；认为慢性乙肝和糖尿病、高血压等慢性病一样，一旦得了，得一辈子吃药，就是一场没有尽头的马拉松。

　　王宇明称，出席本次学术会议上的许多专家通过自己的临床治疗实践证实：中青年慢性乙肝患者，如果没有进展到失代偿肝硬化程度，就有机会通过长效干扰素α-2a治疗方案，直接抑制乙肝病毒的复制，同时调动自身免疫系统的力量，清除乙肝病毒和受病毒感染的肝细胞，争取到临床上的最佳获益——彻底治愈，而不必年纪轻轻就成为终生的药罐子。

　　王宇明认为，由于缺乏健康管理意识，内地许多病人往往不主动询问、了解自身病情阶段，而错失本可达到的最好治疗效果。慢性乙肝所涉及的诊断、检测指标较多，治疗较复杂，所以乙肝治疗效果需要综合评价。

　　他进一步分析说，患者如果不能有效地配合医生，采用适合的治疗方法，仅盲目地追求转氨酶正常、短期病毒载量下降，就可能不得不依赖长期口服药物来抑制病毒复制。如果不停药，病毒有可能变异，产生耐药，疗效下降；而一旦停药，病情又可能反复；从而最终陷入到一个进退维谷的局面，患者只能艰难地负“病”前行，看不到终点。

　　王宇明强调，以往的乙肝治疗方案普遍持续应答率较低，使大大多数患者不得不接受长期药物治疗。但此次公布的最新临床实验证明，对中青年、免疫系统基本正常的慢性乙肝患者，在疾病没有进展到失代偿肝硬化程度之前，可采用长效干扰素治疗方案，双管齐下，直接抑制病毒复制，并且调动自身免疫力量清除病毒，最终可摆脱药物纠缠，避免病毒变异和停药疾病反跳风险，从而重新获得健康的生活。

　　面对中国数量巨大的病毒携带者和患者群，王宇明代表与会专家向有关部门和社会各界呼吁：大力推广乙肝治疗的科普常识，推进患者个人的健康管理意识，帮助他们根据疾病发展情况，抓住机会采用正确的治疗方案，避免因此带来的健康和经济上的巨大压力，减轻个人和全社会的医疗经济负担。

香港大学和香港中文大学1月3日发表的两项研究结果显示，用于治疗乙型肝炎的新药“替比夫定”比两种传统药物更能有效抑制病毒。

香港大学和香港中文大学3日联合举行发布会，发表了乙肝新药“替比夫定”与传统药物“拉米夫定”及“阿德福伟”的成效对比研究结果。

两项研究共有1000多名来自世界各地的慢性乙肝病人参与，结果均显示，经过一年的治疗后，60%服用新药病人的血清中病毒含量降到无法检测的水平，而服用传统药物的病人只有约40%出现相同情况。此外，新药的副作用小，其抗药性也低于两种传统药物。

香港中文大学医学院肝脏护理中心主任陈力元教授表示，治疗乙肝必须尽早使用安全而强效的疗法，大幅降低病毒数量。此次研究结果证明了新药的疗效。

香港大学和香港中文大学的上述研究结果2007年12月已分别在英国和美国的医学杂志刊登。

　　荷兰乌特列支大学研究人员利用一种最新开发的喷洒技术，绘制出了乙型肝炎病毒的结构与组成图。该项研究成果发表在最新一期《美国科学院院刊》和《应用化学》期刊上，将使科学家更进一步地理解并对抗乙型肝炎传染。该研究方法也能用于分析恐怖分子可能使用的生化武器所含的病毒。

　　为更好地理解并对抗病毒感染，有必要在分子水平上仔细检查病毒。科学家可利用质谱仪技术来识别分子，这种技术也可用于法医调查中的涂料痕迹鉴定。质谱仪技术特别善于鉴别小分子，但病毒“太大”以致于无法使用标准的方法来完成此事。

　　为此，乌特列支大学研究人员夏洛特•优特雷希特别为该研究项目开发了一种可完好无损地喷洒病毒的改进型质谱仪技术。研究人员在高压电荷下将水和病毒一起喷洒，这种可将病毒和水分离的技术能使研究人员对病毒进行分别检查。整个喷洒过程类似于经由打喷嚏而形成的感冒病毒传播方式。

　　利用该改进型质谱仪技术，研究人员观察了乙型肝炎病毒的结构与组成。在分光计的辅助下，研究人员不仅看到了病毒的各种不同形状，还观察到了病毒的分子结构，这使得未来通过阻止病毒生产来对抗病毒感染成为可能。

台湾“中研院”针对乙肝病毒的DNA研究，日前获得重大突破，为预防肝癌带来新契机。研究结果指出，乙肝病毒的基因特质不同，诱发肝癌风险也不相同。有一种会增加得肝癌的危险性，另外一种却会降低危险。

“中研院”院士陈建仁的研究团队曾于2002年发表一篇研究论文指出，代表乙肝病毒在人体内大量复制的“乙肝病毒e抗原阳性”指针，可以预测肝癌发生的风险，“e抗原呈阳性”者得到肝癌的机会，是呈阴性者的六倍。但是“e抗原呈阴性”的带原者得到肝癌的风险仍然相当高。

为了解释这个疑点，研究团队决定将研究方向推进到乙肝病毒的DNA。结果发现乙肝病毒DNA浓度越高，未来得到肝癌的危险也越大。

陈建仁解释，检测乙肝病毒可分为“基因型”及“突变型”。“基因型”如果带原者所感染的是C基因型乙肝病毒，比起感染B基因型乙肝病毒，有两倍得到肝癌的风险。若是“突变型”，带原者体内的乙肝病毒在DNA不同区域发生突变，得到肝癌的可能性就会呈现逆向反应，一是会增加两倍风险，另一是大幅降低得到肝癌的可能性到三分之一。
韩科学家发现乙肝癌变原因与p53蛋白质有关。

南开大学生命科学学院分子生物学研究所肿瘤研究室张晓东教授的课题组进行的一项研究结果表明，乙型肝炎病毒(HBV)基因组中的X基因表达的X蛋白（HBx）的自然突变与HBV的致癌作用有密切的关系，并初步揭示了其致癌的分子机制。

HBV感染与肝细胞癌(HCC)的发生具有十分密切的关系，我国每年死于肝癌的患者约15万人。研究表明，HBV的X基因及其表达的HBx蛋白在HCC的发生发展中具有十分重要的作用。

HBx是一种多功能的病毒调节因子，通过调节细胞和病毒的转录活性、信号转导途径、基因毒性应激反应、蛋白质降解等多个方面，直接或间接地影响HBV的复制和肝细胞的增殖与凋亡，并具有促肝细胞转化的作用。因此，揭示X基因和HBx蛋白致癌的分子机制具有十分重要的理论意义和实际应用价值。

在此项研究中，南开大学的研究人员从慢性肝病患者的血清和组织中分离得到乙型肝炎病毒X基因突变株，发现HBx蛋白羧基端27个氨基酸缺失对人正常肝细胞L-O2的生长具有明显的促进作用，并进一步证明该HBx蛋白突变体通过激活NF-κB、Survivin和人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子的转录活性，上调c-Myc蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达促进肝细胞的增殖。

张晓东教授表示，从乙型肝炎病毒X蛋白突变体的角度研究乙肝病毒感染与原发性肝癌发病机制的关系，是对此研究领域的一个导向和推动，可能成为一种突破性的研究进展。

香港大学公布的一项研究结果显示，纳米银颗粒能抑制乙型肝炎病毒的复制，降低乙肝患者肝硬化的几率。专家预计，未来３至５年这一成果就可进行临床实验。

香港大学医学院研究人员３年前开始进行纳米银颗粒抑制乙肝病毒机理和复制活性的研究，结果证实纳米银颗粒可直接与乙肝病毒发生作用，抑制病毒的复制。

香港大学医学院内科学系教授廖家杰说，纳米银颗粒的表面活性面积较大，容易和乙肝病毒结合，从而抑制病毒复制，减少病毒数量，而乙肝病毒对这一连串机理产生抗药性的机会微乎其微。

廖家杰表示，预计纳米银颗粒治疗乙肝在未来３至５年可进行临床实验。

　　9月26日，“乙型肝炎重症化临床监测及防治的基础研究”973重大项目将在京启动，这一项目旨在根据我国国情和国际重症肝炎研究现状，揭示乙肝从轻症发展到重症的分子机制和关键环节等，建立具有临床指导意义的重症化科学评估体系，并探索乙肝重症化的防治新方法。

　　该项目由华中科技大学附属同济医院感染科主任宁琴教授担任首席科学家，由8所高等院校共同参与，集中了国内在重症乙肝病毒学、分子遗传学、免疫学和生物治疗等领域有良好研究积累的优势专家群体。

　　据悉，乙肝是我国发病率最高的传染病之一，乙肝病毒携带者大约有1.2亿人，且死亡率居我国报告传染病的前三位。全国每年用于肝病治疗的直接费用达1000万元。乙肝一旦由轻症转化成重症，只能通过肝移植治疗，而肝源供不应求、肝移植费用普通人难以承受，使我国许多肝病患者无法接受肝移植而死亡。即使在以肝移植为主要治疗手段的国外，患者移植后1年内存活率也只有50％至60％。

　　此外 ，国外重症肝炎病的病因与中国不同，前者主要由药物、酒精等中毒所致的急性肝衰竭引起，而我国主要由病毒引起。因此中国科学家必须立足国情，关注乙肝研究。

我国目前对乙肝重症化的过程缺乏系统性研究，对其发生机制不甚明了，临床也缺乏切实可行的综合评价体系，成为重症肝炎不可预测和难治的根本原因。在9月初召开的中国科协年会上，卫生部部长陈竺提出了7个全民健康相关行动计划，“肝病防治行动计划”居首位。即将启动的973项目中，有两项是关于肝病研究的。

　　韩国科学家的最新研究发现，一种由乙肝病毒生成的蛋白质，是导致乙肝在发展过程中发生癌变的原因。

　　由韩国东国大学教授金铁虎率领的科研小组近日指出，p53蛋白质可以抑制癌变，但他们的研究表明，由乙肝病毒生成的4种蛋白质之一x型蛋白质(HBx)与p53蛋白质结合在一起时，会抑制p53蛋白质的活动，特别是它能切断p53蛋白质向抑制肝癌生成的
PTEN基因发出的信息，使PTEN活动萎缩，最终发生癌变。

　　金铁虎教授说，迄今有科学家通过对细胞的研究搞清了乙肝生成的过程，但他们的研究成果首次在分子层面发现肝癌的成因。