羊水细胞染色体标本的制备

一、原理

人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养，但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞，依据其外形和生长特征可区分为以下三类：上皮细胞（E）、成纤维细胞（F）和羊水细胞（AF）。

E细胞在胰酶消化的连续培养中不再生长，所以在培养过程中的生长期最短。AF细胞在再培养中一开始就长得很好，染色体分析大多用这类细胞。F细胞在再培养中潜在的生长期最长，在较老的羊水培养物中占优势。通常在培养后3-4天（可能更早些）即出现E细胞的集落，它们不适合再培养作染色体分析。

大约在第7天出现的AF细胞可被用于染色体制备。如果在培养后第10天还未见长出新的细胞，就应考虑第二次羊膜穿刺。

二、用品和试剂

灭菌刻度离心管，0.25%胰蛋白酶，生长培养基（成分：RPMI-1640 80%，灭活小牛血清20%），其余同外周血染色体制备。

三、操作步骤

1. 10-20ml无菌羊水，1000-1500rpm离心10分钟，吸去上清，保留1ml羊水和沉降的细胞。

2. 用吸管使之悬浮，并吸至25ml细胞培养瓶中，每瓶含约0.3-0.5ml细胞悬液，再向其加入3ml生长培养基。

3. 摇匀后37℃静止培养5-7天（不要挪动，以免影响细胞贴壁）。

4. 倒置显微镜观察，可见部分细胞贴壁生长并形成细胞小岛，此时可以换液。

5. 常规细胞培养至第9-11天即可收获细胞。

6. 终止培养前4小时加秋水仙碱，使终浓度为0.1微克/毫升。

7. 培养结束用1ml胰蛋白酶液消化5分钟，终止消化，并转移至10ml离心管中，1000rpm离心10分钟，收集细胞。

8. 常规制备染色体，步骤同外周血染色体制备。