血清谷丙转氨酶(SGPT)的测定

【目的和要求】

1. 了解谷丙转氨酶活性测定的基本原理。

2. 掌握谷丙转氨酶活性测定的方法。

【实验原理】

血清谷丙转氨酶(SGPT)能催化丙氨酸和α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸在酸性条件下与2，4－二硝基苯肼可缩合生成丙酮酸二硝基苯腙，其在碱性条件下呈现棕红色，在520nm处有最大吸收。

根据颜色的深浅，通过比色法可计算出酶活性。GPT在肝脏中含量最多，当某种药物对肝脏早晨损害或病毒肝炎的急性阶段，由于肝细胞受损， GPT就释放到血液中，使血清中此酶水平明显升高。因此测定血清谷丙转氨酶的活性可作为诊断肝病的重要指标。

【实验试剂和器材】

（一）试剂

1. 0.1M磷酸盐缓冲液（pH7.4）

2. 丙酮酸标准液（2μMol/ml）

准确称取22mg纯净丙酮酸钠，用0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液定容至100ml。

3. 谷丙转氨酶底物溶液

准确称取α－酮戊二酸29.2mg（2mM）， DL －丙氨酸1.78g（200mM），溶于50ml 0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液中，用20% NaOH调pH为7.4，然后加以上磷酸盐缓冲液至100ml，加几滴氯仿防腐，冰箱保存可放一周。

4. 2，4－二硝基苯肼溶液（1mM）称取2，4－二硝基苯肼20mg，置于100ml容量瓶中，先用10ml浓盐酸溶解后，再加水稀释到刻度。

5. 0.4M氢氧化钠。

（二）器材

试管及试管架， 0.1、0.5 、1及5ml吸量管，恒温水浴，722型分光光度计 。

【实验方法】

（一）标准曲线绘制

以吸光度值为纵坐标，酶活力单位数为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。

（二）血清SGPT活力测定

【注意事项】

1. 在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。

2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过500U时，需将样品稀释。

3. 转氨酶只能作用于α－L－氨基酸，对D－氨基酸无作用。实验室多用α－DL－氨基酸（较L－氨基酸价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。

4. 溶血标本不宜使用，因血细胞中转氨酶活力较高，会影响测定效果。

5. 血清样品的测定需在显色后30分钟内完成。