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病毒的血清学诊断

相关实验:呼吸道感染病毒及其检验

最新修订时间:

简介

血清学方法可以用来确定呼吸道病毒感染,但因这需要收集至少相隔两周的双份血清来评价(急性期和恢复期),故很少用于临床诊断,目前该方法常用于流行病学调查和临床研究。血清抗体水平增加4倍或更多,被认为是感染的证据,有多种方法可以使用。

材料与仪器

器材:
①一次性无菌手套
②标本采集管
③棉签拭子
④PCR仪


试剂:
①材料:待采标本
②PBS缓冲液

步骤

病毒血清学诊断根据病毒种类不同,其基本步骤可分为如下几种:


1.补体结合实验 补体结合试验(CF)是相对容易实施的检测法,已能检测流感病毒,呼吸道合胞病毒,副流感病毒,腺病毒和冠状病毒229E和OC43,这些检测法以属或型特异性抗原表位为靶目标。

由于异型反应和中和反应所测得的缺乏血清反应相关性,CF试验尚用于鼻病毒和肠道病毒的检测。针对新近发现的病毒如人偏肺病毒和新的冠状病毒的CF检测法还有待进一步研究。


2.ELISA操作相对容易,可重复性好,可用于测定血清或者呼吸道分泌物中的抗体。使用的抗原可以是病毒颗粒,或者病毒的蛋白,因此检测的适应范围广,即可是属特异性,也可是型特异性,方法经过改良后可用于感染或接种疫苗后特定免疫球蛋白(IgG抗体,IgA抗体,IgM抗体)的测定。


3.血凝素抑制试验 可对有血凝素活性的病毒进行检测,包括流感病毒、副流感病毒、冠状病毒OC43、一些腺病毒、鼻病毒和肠道病毒。不是所有的病毒都会使同一动物的红细胞凝集,所以实验中红细胞的选择是基于病毒血凝素的凝集范围决定的。

血凝素抑制试验最常用于流感病毒和副流感病毒检测,通常使用鸡或火鸡红细胞来检测流感病毒血凝素抗体,需注意的是测定H1N5的抗体时推荐使用马血细胞。

豚鼠或人红细胞可用于副流感病毒血凝抑制试验。进行血凝抑制实验前,用受体破坏酶预处理待检人血清,以除去人血清中的非特异性抑制因子,避免出现血凝素抑制试验的假阳性。

4.中和试验是基于血清中和抗体能阻止病毒复制的原理设计的实验,适用于可培养病毒中和抗体的检测。中和抗体的量可通过系列稀释的血清与已知定量病毒作用后,通过细胞病变的减少,或者培养物血凝效价的降低,或者空斑形成单位减少来显示。

来源:丁香实验

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