病毒 的血清学诊断

血清学方法检测可疑患者血清的抗体。这个方法也适用于抗体普查、疫苗效果观察、流行病学调查及临床感染的确定。

器材：
①一次性无菌手套
②标本采集管
③棉签拭子
④PCR仪

试剂：
①材料：待采标本
②PBS缓冲液
③琼脂

（一）痘病毒

1．血凝抑制试验 痘病毒中，只有正痘病毒产生血凝素。不同种正痘病毒含有相同的血凝素抗原，通常用痘苗血凝素做抗原检测其他正痘病毒抗体。

50％ 鸡红细胞对正痘病毒血凝素呈阳性反应。因正痘病毒种间有交叉抗原，只用HAI不能做出准确诊断，需参照临床、流行病学资料确诊。血凝抑制抗体是感染后最早出现的抗体。天花和猴痘的抗体在感染后4～7天内出现，第2周达到高峰，效价一般在1：80以上，少数可超过1：1000。

2．中和试验 正痘病毒的中和试验可在培养的细胞或鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）上进行；副痘病毒和塔那痘病毒只能在培养的细胞中进行抗体检测。中和试验不适用于雅巴及传染性软疣病毒抗体的常规检测。

（二）疱疹病毒

检测HSV特异性抗体的血清学检测在临床上应用不十分广泛，可能与HSV在自然界中感染非常普遍，绝大多数人体内已存在病毒抗体；还可能与HSV-1和HSV-2存在50％ 的基因同源性，两型病毒存在交叉抗原性，因此，两型抗体均能与另一型病毒发生交叉反应有关。一般只用做回顾性或记录性调查。

（三）人乳头瘤病毒

由于不易得到大量的人乳头瘤病毒抗原，阻碍了血清学诊断的研究和应用。以下的各种方法各有利弊：

1．从皮肤疣组织中提取病毒抗原检测血清中的抗体，因提取的病毒抗原量不多，限制了其临床应用。
2．人工合成的病毒蛋白表位为抗原的多肽ELISA，由于合成的线性表位，不能完全代表构象特点，临床应用价值不大。
3．以细菌表达融合蛋白为抗原的蛋白印迹法，但阳性率很不一致。
4．以体外转录和转译的病毒蛋白为抗原的放射免疫沉淀法（TT-RIRA），由于放射沉淀法较为复杂，不宜推广应用。
5．人乳头瘤病毒结构蛋白L1自身形成的VLP为抗原的VLP-ELISA。L1-VLP是以痘苗病毒、杆状病毒为L1基因载体，在真核细胞或昆虫细胞中表达产生的，VLP代表了病毒颗粒的空间构象。

（四）新型疱疹病毒的实验室诊断

1.人疱疹病毒6型常用新鲜制备的正常人脐血或外周血淋巴细胞、人T细胞株JJHan和Molt分离培养。新鲜制备的人脐血或外周血淋巴细胞经PHA刺激后对各种人疱疹病毒6型分离物易感，感染细胞一般在接种后2～4天即出现病变。

2.用于病毒分离的样本多为血淋巴细胞、器官组织、唾液、气管分泌物等。血清学特异性诊断多采用间接免疫荧光法。PCR是常用的人疱疹病毒6型DNA检测手段。

3.人疱疹病毒7型用外周血和脐血淋巴细胞或T细胞株SUP-T1分离培养。血清学诊断用免疫荧光法。PCR一般用巢式PCR。

4.人疱疹病毒8型DNA特异性诊断方法为PCR。若需进一步证明PCR产物的特异性，可将产物做核酸杂交进行鉴定。