二维凝胶电泳质谱技术图像分析
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目前主要的二维凝胶电泳专业图像分析软件有BIO―RAD公司的PDQuest 6.0、Amersham Pharmacia Biotech的Image Master 2D Elite和Genomic Solutions开发的Biolmage 2D Investigator等。Image Master 2DElite的操作界面较好,简便易学,且可处理各种来源的tif图像。
而PDQuest 6.0只能处理BIO―RAD公司的gsc格式图像。MelanieⅡ则较为完善,可在Sun工作站、Mancintosh和PC微机上运行,并能连通各种蛋白质数据库,取得目标蛋白的各种信息。
二维凝胶电泳图像分析主要步骤包括图像扫描、斑点检测、背景消减、斑点配比和数据库构建。
另外,还可绘制二维凝胶电泳蛋白质点的矢量图(vector map of the 2―DEgel),可初步分析蛋白质的翻译后修饰和加工,即将二维凝胶电泳凝胶上的位置与理论预测位置连一直线,即为该蛋白质的矢量。如果一个蛋白质有多个矢量,表明该蛋白质可能有多个翻译后修饰。
但当前的图像分析软件仍有许多有待提高之处:
①每张凝胶大约总有10%的点未被识别,另有一些则是“假点”,还有一些点因距离过近而被识别成一个点,所有这些需要手工添加、删除或分割。
②手工匹配需要大量时间,且会导致错配发生。
因此,二维凝胶电泳分析软件的自动化程度还有待提高,应向高分辨率、高灵敏度、智能化的方向发展。