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利用BLOCK-iT™ Dicer RNAi试剂盒进行RNAi分析

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选择BLOCK-iT™ Dicer RNAi 试剂盒,利用RNA干扰技术 (RNA interference,RNAi )进行简单、快速的基因阻断,您不必再花费时间设计siRNA oligo序列及检测它们的效率,就可直接获得RANi结果。

功能基因阻断研究的简单、快速的方法

RNA干扰(RNAi)正在成为一种最受欢迎的技术之一,用于在功能分析试验中有效地阻断特异基因的表达。通过这种方法,利用长度为21-23个核苷酸 的小干扰RNA(siRNA)可以很容易地、特异地降解互补靶mRNA。

当前常用的用来在哺乳动物 细胞中启动RNAi反应的方法包括以下几种:转染 合成的siRNA寡核苷酸(siRNA oligonucleocides),体外转录 后通过Dicer酶将长的双链RNA(dsRNA)切割成Diced siRNA (d-siRNA),或者导入能够表达siRNA的载体 。

在这些方法中,只有体外转录 和切割(Dicing)能够形成d-siRNA 双链体的复杂池,继而经过转染 进入细胞。这一过程可以很快产生结果,而无需再花费时间设计和检测多个序列,并确定哪一个将会导致显著的基因表达 阻断。

现在您可以通过BLOCK-iT™ Dicer RNAi 转染和BLOCK-iT™ Dicer RNAi TOPO®转录试剂盒简便、快速的获得所需要的RNAi的原始数据,方便地研究和选择模式系统中的目的基因。

BLOCK-iT™ Dicer试剂盒作用原理

BLOCK-iT™ Dicer反应的第一步是构建dsRNA模板。您可以通过BLOCK-iT™ Dicer RNAi TOPO®转录试剂盒(包括在BLOCK-iT™ complete Dicer RNAi试剂盒中)很容易地得到转录本,而且转录本产量大,纯度高.

能够直接用来作为BLOCK-iT™ Dicer反应的底物,用高活性的Dicer酶消化后,使用试剂盒中提供的柱子快速纯化最终的d-siRNA,就可获得高纯度的d-siRNA库,并可以使用有口皆碑的Lipofectamine™ 2000转染试剂 将它导入细胞。

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您需要的一切

BLOCK-iT™ Dicer RNAi TOPO®转录试剂盒包括了从将T7 TOPO®接头(linker)连接到PCR 产物,到快速并高产量地合成长dsRNA所需的全部试剂。BLOCK-iT™ Dicer RNAi 转染试剂盒提供了您需要获得和转染基因特异的siRNA库的所有试剂。包括:

~undefined 高质量的Dicer酶,可以形成高产量的21-23个核苷酸d-siRNA池

~undefined 专门开发的RNAi纯化模块,用来从Dicer反应物中提取高纯度的siRNA.

~undefined 易于使用的Lipofectamine™ 2000,进行哺乳动物细胞高效的转染您可以单独购买BLOCK-iT™ Dicer RNAi 转染试剂盒或BLOCK-iT™ Dicer RNAi TOPO®转录试剂盒,也可以随BLOCK-iT™ complete Dicer RNAi试剂盒一起购买。

获得有效的阻断结果

使用BLOCK-iT™ Dicer RNAi 转染试剂盒,您可以构建d-siRNA池,并立即用来进行RNAi实验,这是快速产生基因阻断数据的关键。因为您是以一个复杂的d-siRNA库开始,不必把时间花费在设计和检测多个siRNA寡核苷酸。

您可以对您的结果充满信心,因为在每一个将转录本切割后得到的池中更可能存在多个高效的siRNA,您可以马上开始筛选基因和收集数据。只要将每一个siRNA池转染到选择的细胞系,就可以观测到内源基因或报告基因活性的阻断情况。通过使用经由dicer方法获得的siRNA混合物,您将会获得有价值的阻断结果。

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