如何定量支原体

计算支原体的菌数不能用血球计数板、比浊法等，需要采用菌落形成单位（CFU）计数法或者颜色改变单位（CCU）测定法。这两种计数法都需要几天才能出结果，也就是原来待测菌液的菌数。请问如何将该菌液保存下来，以便接下来的定量共同培养、抗药等实验？

如果是直接将菌液放到－20度或者－70度冰箱保存，直到需要的时候再溶解，那么冻存过程中肯定有一定数量的支原体死亡，解冻后的菌液菌数也许远低于测定值CCU/CFU吧。是否需要加入甘油或DMSO作为冻存保护剂。

是否有一种公认的常规的方法来做加入定量支原体的实验呢？

首先，支原体保存可以用甘油！

支原体定量确实是个难题，我觉得有个方法可以解决你说的冻融问题。

在相同条件（温度、时间、保护剂浓度、培养基）下，冻融一次的死亡率应该是恒定的，因此你在冻融前后都定量一下，计算死亡率是多少，以后每次冻一大批，测冷冻之前的量就可以了。

当然，以我的经验，冷冻时间长短对支原体有一定影响，但影响不大，半年之内都没问题吧。

一般来说支原体的培养是无法计数的，由于其太小了，所以用ccu（colour change unit） 来表示 ，具体的实验判别手段也是依据其颜色的变化，但是不知道大家注意到没有，我查过美国的支原体判别标准。

在培养的过程中，会有一步是说在加入琼脂后的固体培养基上培养会形成油煎蛋型的菌落，我不知道是否可以用于计数，但是，我想这对于打开我们的思路也是有好处的阿！

补充一下啊。关于保存的问题直接保存在-20度的冰箱中就可以了，没有问题的，保存的时间长了都要拿出来纯培养3代的阿。