以毛细管转移进行Northern Blotting转印实验方法与步骤

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要进行北方杂合反应前，必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上，这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、真空转移法 (vacuum transfer) 与电转印法 (electroblotting)。

毛细管转移法借助吸水纸吸收转移缓冲液时所产生的牵引力量将RNA自洋菜胶体转移至膜上;要转印完全，起码需要作用6 h以上。 虽然所需花费的时间比较长，以其不须要特别的仪器设备 ，毛细管转移法目前仍被普遍采用。 若分析RNA时采用变性聚丙烯酰胺胶体电泳，则必须以电转印法进行RNA转印。

至于膜的选择，硝基纤维素膜的优点是比较不会产生非专一性反应;不过其一旦被润湿再烘干的后，容易碎裂，不适用于进行多次杂合反应。 尼龙膜的优点是韧性好，与核酸结合的能力也相当强，正可以弥补硝基纤维素膜的缺点，现已成为主流。

一旦将RNA转移至膜上后，即可以利用紫外线照射法 (uv irradiation) 或真空干燥法 (在真空下80℃加热2 h) 将其固定于转印膜上。

仪器用具：

塑料盒;玻璃板;裁纸刀

药品试剂：

20×SSC (3 M NaCl, 300 mM sodium citrate);尼龙膜;3MM 滤纸;吸水纸;dH2O/DEPC

方法步骤：

1) 将甲醛洋菜胶体移放在塑料盒内，以dH2O/DEPC冲洗数次，以便去除甲醛。

注意：在移动胶体时请特别留心，不要把胶体弄破了!

2) 注入100 mL 20×SSC，静置5 min。

3) 根据图所示，依序在塑料盒上堆栈玻璃板、滤纸 (作为盐桥)、电泳胶、尼龙膜、三层滤纸、与吸水纸，以便以毛细管转移方式将RNA 转印于尼龙膜上;塑料盒内装入适量20×SSC，以便作为转移缓冲液。

<center> <img alt="以毛细管转移进行Northern Blotting转印实验方法与步骤" height="213" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/08/27/A1377590553.gif" width="323" /></center>

以毛细管转移法进行核酸转印

注意：

a. 滤纸与尼龙膜应先以20×SSC 润湿，再用于堆栈。

b. 在滤纸、尼龙膜、与电泳胶夹层间可能会有气泡存在，因此在放好电泳胶、尼龙膜或滤纸后，应立即检视，并以食指轻轻平移的方式小心赶走气泡。

c. 此转印步骤将持续至隔天才结束。