原理
向上毛细管转移法的一个缺点是凝胶可能被加于其上面的加有重物的滤纸层和纸巾塔压紧,从而降低毛细管作用。
材料与仪器
DNA
SSC
转移塔 滤纸
SSC
转移塔 滤纸
步骤
一、实验步骤
1. 按印迹法步骤1~4(高盐转移)所述处理凝胶。
2. 如下图所示,安装转移塔,其组成依次为
(1)置于一玻璃平皿中的纸巾塔(1~3 cm 高),4张Whatman 3 MM 滤纸,第5张滤纸用转移缓冲液浸湿。
(2)用蒸馏水润湿的尼龙膜或用20xSSC润湿的硝酸纤维素膜,塑料薄膜,凝胶。
(3)3张Whatman 3 MM 滤纸,2 张较大的预先用转移缓冲液润湿的Whatman 3 MM滤纸,从叠层上延伸到转移缓冲液池中。
1. 按印迹法步骤1~4(高盐转移)所述处理凝胶。
2. 如下图所示,安装转移塔,其组成依次为
(1)置于一玻璃平皿中的纸巾塔(1~3 cm 高),4张Whatman 3 MM 滤纸,第5张滤纸用转移缓冲液浸湿。
(2)用蒸馏水润湿的尼龙膜或用20xSSC润湿的硝酸纤维素膜,塑料薄膜,凝胶。
(3)3张Whatman 3 MM 滤纸,2 张较大的预先用转移缓冲液润湿的Whatman 3 MM滤纸,从叠层上延伸到转移缓冲液池中。
3. 在叠层顶上放一轻质的塑料盖(如凝胶平板)以减少蒸发。放置1 h。
4. 取下膜,用2xSSC漂冼,晾干。固定DNA并将膜保存于室温。
4. 取下膜,用2xSSC漂冼,晾干。固定DNA并将膜保存于室温。
二、向下毛细管转移的转移塔图
来源:丁香实验