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Southern 印迹实验

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

Southern印迹法是将DNA片段从电泳凝胶中转移至膜支持物上,使DNA片段固定,因此该膜半永久性地重现出凝胶电泳的带型。

来源:丁香实验

操作方法

印迹法

一、向上毛细管转移法的转移叠层系统: 图一、向上毛细管转移法的转移叠层系统,A表示海绵法,B表示滤纸桥法 二、实验步骤 1. 用适当的限制性内切酶消化DNA,与合适的DNA分子量标准一起进行琼脂糖凝胶电泳。 2. 用溴化乙锭染色,在凝胶的侧沿放一把直尺进行照相,便于以后识别电泳带在膜上的位置。 3. 按如下方法处理凝胶,室温下轻轻摇动,要确保凝胶被完全覆盖。

碱性缓冲液法

1. 印迹法中步骤1和歩骤2中所述准备凝胶及用0.25 mol/l HCl处理。 2. 用蒸馏水漂洗凝胶,并用10倍体积的0.4 mol/l NaOH变性,缓慢摇动20 min。 3. 用0.4mol/l NaOH替代20xSSC作为转移液进行转印。转印时间≥2 h。 4. 取出膜,用2xSSC漂洗,置于一张Whatman 3 MM 滤纸上晾干,保存于室温。

向下毛细管转移法

一、实验步骤 1. 按印迹法步骤1~4(高盐转移)所述处理凝胶。 2. 如下图所示,安装转移塔,其组成依次为 (1)置于一玻璃平皿中的纸巾塔(1~3 cm 高),4张Whatman 3 MM 滤纸,第5张滤纸用转移缓冲液浸湿。 (2)用蒸馏水润湿的尼龙膜或用20xSSC润湿的硝酸纤维素膜,塑料薄膜,凝胶。 (3)3张Whatman 3 MM滤纸,2 张较大的预先用转移缓冲液润湿的Wha

电转印法

1. 在非变性或变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳DNA样品。 2. 电泳将近结束时,将一张大小足以覆盖凝胶中相应部分的尼龙膜漂浮于蒸馏水表面,然后浸入水中泡5 min。 3. 从电泳装置中取去一块玻璃板,染色后对凝胶进行照相(如果是非变性胶)在凝胶的表面铺一张Whatman 3 MM 滤纸,排去其间的所有气泡。 4. 揭起滤纸将凝胶剥离玻璃板。 5. 将2块Scotch-Brite垫浸泡于0.5

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