时间分辨荧光免疫分析技术在HBVM检测中的应用

我国是乙型肝炎高感染的国家。有资料显示，全国人口中有10％以上为乙肝携带者，感染率非常高，而低浓度在人群中的分布率为0.53％［1］。

目前常规的ELISA检测方法容易造成漏诊［2］，在临床上应用有一定局限性。随着免疫技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度得到了明显提高，而TRFIA是一种高灵敏、准确、快速的方法，可以较大的减少漏诊。

本文用这两种方法检测HBVM，旨在探讨二者之间的关系及临床应用。

一、材料与方法

（1）研究对象

采用我院门诊及住院患者102例，其中男61例，女41例，年龄9岁～51岁，平均（284±17.7）岁。

（2）仪器和试剂

TRFIA法使用上海新波生物技术有限公司生产的Anytest-2000型时间分辨荧光免疫分析系统及配套试剂。ELISA法使用奥地利BIOELLHTⅡ型自动酶标仪，试剂由兰州标佳生物技术有限公司提供。

（3）检测方法

102例血清标本同时使用TRFIA及ELISA两种方法检测。

（4）统计处理

测定结果用配对资料χ2检验统计。

二、结果

（1）对102份血清标本同时使用TRFIA和ELISA两种不同方法测定，对产生的各种乙肝医学模式进行比较。检测时，将抗原抗体排序：以HBsAg为1，HBsAb为2，HBeAg为3，HBeAb为4，HBcAb为5。其中1、5阳性模式检出率分别为3.92％，10.78％，差异有显著性（P<0.05），其他医学模式差异均无显著性（P>0.05）。

（2）对HBVM中的各项目用这两种方法检测的结果进行对照。TRFIA法的检测阳性率均略高于ELISA法，但都差异无显著性（P>0．05），对HBsAg、HBsAb、HBcAb的检出符合率为100％。HBeAg、HBeAb用ELISA法检出率相对较低，漏检率为7.84％（8/102）。　　

三、讨论

HBVM的变化是评估乙型肝炎感染后病情转归的重要依据，也是抗病毒治疗的疗效考察指标之一，目前国内检测HBVM使用较多的仍是ELISA法，主要有以下缺点：无法定量；灵敏度低；由检测原理带来的前带现象无法解决；易传染，无法完成HBV感染的动态观以及低水平HBV感染指标检测。

本研究显示，TRFIA法对HBVM的检出率与ELISA法虽差异有显著性（P>0.05），但TRFIA法还是高于ELISA法，以TRFIA为标准，ELISA法对HBVM的检出符合率分别为100.00％、100.00％、73.33％、88.24％、100.00％。

由此可见，对于TRFIA法而言，ELISA法漏检的指标主要集中在HBeAg和HBeAb这两个项目上，总漏检率为7.84％。究其原因，主要是因为TRFIA的灵敏度较高，使其能检测到低浓度的抗原和抗体，初步解决了隐源性肝炎中HBV标志物检测的问题。

TRFIA法是近年来发展的无污染、高灵敏度的免疫标记检测技术。因稀土离子本身激发光谱宽而产生荧光发射光谱窄，从而保证了该技术的高精密度，以稀土离子为标记物，通过时间延迟技术，去除了非特异性荧光干扰。

明显提高了检测灵敏度，并通过激发光与发射光之间较大的STOKES位移，提高了光谱的分辨率，使特异性明显增强，又采用了独特的荧光解离增强技术，可使有效荧光的效率增强约100万倍，从而使灵敏度增高，并具有定量检测功能［3］。

有文献［4］报道，TRFIA对HBsAg的最小检测浓度可达到0.05 ng/ml，比ELISA法约高10倍。就乙肝医学模式而言，本研究显示：ELISA法检测1、5阳性者及2、5阳性者的人数要高于TRFIA法，并且两种方法在前者的检测率上差异有显著性（P<0.05）。

TRFIA法在其他模式上的检出人数均高于ELISA法，主要还是由于ELISA法检测HBeAg与HBeAb的阳性例数较低所致，故使乙肝医学模式的鉴定有所差异，并将可能造成临床诊断及治疗的失误。

有资料报道［5］，5%~10％的普通人和98％的新生儿在感染HBV后都有能力清除病毒，因此成为慢性携带者。有1/3的HBsAg携带者中的慢性肝炎会在5 a~10 a中转变为肝硬化，如果HBsAg持续6个月以上，就会出现携带状况，当HBsAb浓度至少为100 U/L时，对病的免疫力可维持10 a。

因此检测的灵敏度与准确性就至关重要，TRFIA法就充分显示出了这一方面的优势，它对HBVM有以下临床意义：可以了解药物疗效为医生治疗提供依据；有利于病情动态观察，为治疗方案提供线索；有利于对免疫状况进行评估，为注射乙肝疫苗提供指导。

总之，TRFIA较ELISA结果稳定，并可定量分析，近年来TRFIA技术应用范围不断扩大［6，7］，在微量分析中有着广泛的应用前景。　

参考文献：

［1］王跃国，王惠民，毛利萍，等．MEIA法测定乙肝病毒表面抗原的评价及临床应用［J］．现代检验医学杂志，2004，19(2)：2123.

［2］张运洪，秦苏，何静波，等.ELISA法结合MEIA能有效检测低水平HBsAg［J］．临床检验杂志，2002，20(2)：103．

［3］李振甲，陈沣藻，高平．时间分辨免疫技术与应用［M］，北京：科学技术出版社，1996：2126．

［4］额尔敦，其其格，郭美香，等．双抗HgsAg抗体夹心时间分辨免疫荧光分析方法的建立［J］.中国免疫学杂志，1999，15：808．

［5］魏来，陶其敏.努力规范肝脏疾病免疫学诊断［J］．中华检验杂志，2003，26：6971.

［6］顾爱萍，李庆国，王桂兰，等．丙型肝炎病毒抗体的时间分辨荧光分析方法检测［J］．临床检验杂志，2001，19(4)：215．

［7］黄飚，肖华龙，朱利国，等．糖蛋白抗原199时间分辨荧光免疫分析［J］.中华检验医学杂志，2000，23(3)：171．