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豚鼠T淋巴细胞的测定

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1950

玫瑰花环试验,又称为花结试验。是测定淋巴细胞数量和功能的一种方法。

人类T和B淋巴细胞表面具有不同的受体。由于人类T淋巴细胞表面具有与绵羊红细胞结合的受体,能与绵羊红细胞非特异性结合,形成E花环,因此,T细胞也成为红细胞花瓣形成细胞。根据E—玫瑰花环形成率,可以间接判断机体细胞免疫力。目前,已广泛应用于临床,作为测定人群免疫状态的一个指标。

材料:

1.肝素(100单位/毫升)

2.0.5%兔红细胞悬液(用Hanks液配制)

3.吸收过的胎牛血清:

取经56℃30分钟加热灭活后的胎牛血清加半量压积兔红细胞混合后,37℃水浴20分钟,2000转/分离心10分钟,取上清液即成。

4.Hanks液

5.豚鼠抗凝血

6.淋巴细胞分层液

7.灭菌注射器,针头, 试管 ,吸管等。

方法:

1.淋巴细胞提取

(1)取豚鼠抗凝血2毫升,加3毫升Hanks液使之稀释。加于3毫升淋巴细胞分层液液面之上(沿管壁轻轻加 入,勿使两液相混)。

(2)2000转/分离心30分钟,吸淋巴细胞层到另一 试管 中加5倍体积的Hanks液洗1—2次,(1500转/分离心10分钟)弃上清即成。

2. 加吸收过的胎牛血清0.1毫升,0.5%兔红细胞悬液0.2毫升,于淋巴细胞中。混合后,37℃ 水浴 5分钟。

3. 500转/分离心5分钟,放4℃冰箱中2小时后,弃大部分上清。

4. 染色及观察轻轻悬浮沉积的细胞。向悬液中滴一滴美兰液,混合,10分钟后取一滴放载玻片上,加盖玻片镜检。高倍镜或油镜下计数200个淋巴细胞,凡结合3个或3个以上的兔红细胞者为阳性,计算花环形成细胞的百分率。

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