原理
根据E—玫瑰花环形成率,可以间接判断机体细胞免疫力。目前,已广泛应用于临床,作为测定人群免疫状态的一个指标。
材料与仪器
豚鼠
肝素 兔红细胞悬液 Hanks液 胎牛血清
离心管 离心机 摇床
肝素 兔红细胞悬液 Hanks液 胎牛血清
离心管 离心机 摇床
步骤
1. 淋巴细胞提取
(1)取豚鼠抗凝血2毫升,加3毫升Hanks液使之稀释。加于3毫升淋巴细胞分层液液面之上(沿管壁轻轻加入,勿使两液相混)。
(2)2000转/分离心30分钟,吸淋巴细胞层到另一试管中加5倍体积的Hanks液洗1~2次,(1500转/分离心10分钟)弃上清即成。
图1 用分层液离心后的血细胞层
2. 加吸收过的胎牛血清0.1毫升,0.5%兔红细胞悬液0.2毫升,于淋巴细胞中。混合后,37℃水浴5分钟。
3. 500转/分离心5分钟,放4℃冰箱中2小时后,弃大部分上清。
4. 染色及观察
轻轻悬浮沉积的细胞。向悬液中滴一滴美兰液,混合,10分钟后取一滴放载玻片上,加盖玻片镜检。
高倍镜或油镜下计数200个淋巴细胞,凡结合3个或3个以上的兔红细胞者为阳性,计算花环形成细胞的百分率。
来源:丁香实验