【求助】请教信号通路抑制剂浓度计算的问题
丁香园论坛
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你好,我是临床医学专业的学生,正准备做实验。现在在设计阶段。遇到了我专业知识以外的问题。很焦急,请教这里的大侠
是信号通路抑制剂浓度计算的问题。
1,SB203580是P38-MAPK的抑制剂,分子量是377。说明书上说当IC50为0.3--0.5uM的时候,抑制P38-MAPK磷酸化。那么实验设计里,SB203580抑制P38-MAPK磷酸化的浓度范围是多少?
2,LY294002是PI3K的抑制剂,分子量是344。当IC50为1.45uM的时候,抑制PI3K-Akt信号通路。LY294002抑制PI3K-Akt信号通路的浓度范围是多少?
是信号通路抑制剂浓度计算的问题。
1,SB203580是P38-MAPK的抑制剂,分子量是377。说明书上说当IC50为0.3--0.5uM的时候,抑制P38-MAPK磷酸化。那么实验设计里,SB203580抑制P38-MAPK磷酸化的浓度范围是多少?
2,LY294002是PI3K的抑制剂,分子量是344。当IC50为1.45uM的时候,抑制PI3K-Akt信号通路。LY294002抑制PI3K-Akt信号通路的浓度范围是多少?
使用方式不一定,用的浓度就不一样,不要看说明书上的浓度,我估计一般都偏高吧!
看文章,做预实验是摸索药物浓度的最佳办法!
看文章总结一下别人的药物浓度范围,预实验时就设了个浓度梯度。MAPK的抑制剂在使用的时候要注意副反应的。因为这些抑制剂大多是ATP的类似物,结合在激酶的ATP的结合位点来起活性作用,这样一来就限制了这些抑制剂的选择性了,一般体内的激酶都是ATP结合域,结构也很相似的。那么这些抑制剂可能在较低的浓度选择抑制一种目的激酶,但在较高浓度的情况下,会同时抑制其他的激酶因子,这样我们的结果会有可信度的问题了。因此我们在实验的时候一般选择文献报道过的可达到最大抑制程度的合适浓度就可以了!
一般SB203580,先可以用DMSO溶解成10~50mmol/l的母液,用的时候在用培养稀释到相应的浓度,最后保证DMSO的浓度不能超过0.1%就可以了! 如果DMSO的浓度超过0.1%就会细胞产生毒性作用。
看文章总结一下别人的药物浓度范围,预实验时就设了个浓度梯度。MAPK的抑制剂在使用的时候要注意副反应的。因为这些抑制剂大多是ATP的类似物,结合在激酶的ATP的结合位点来起活性作用,这样一来就限制了这些抑制剂的选择性了,一般体内的激酶都是ATP结合域,结构也很相似的。那么这些抑制剂可能在较低的浓度选择抑制一种目的激酶,但在较高浓度的情况下,会同时抑制其他的激酶因子,这样我们的结果会有可信度的问题了。因此我们在实验的时候一般选择文献报道过的可达到最大抑制程度的合适浓度就可以了!
一般SB203580,先可以用DMSO溶解成10~50mmol/l的母液,用的时候在用培养稀释到相应的浓度,最后保证DMSO的浓度不能超过0.1%就可以了! 如果DMSO的浓度超过0.1%就会细胞产生毒性作用。
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