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【求助】质粒丢失相关问题

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我挑的阳性克隆(已检测),在加有抗生素的摇瓶中培养后,放在4度冰箱一天,枪头蘸取少量,6ml加相应抗生素管摇过夜,菌液浑浊,kit小提,测浓度约150ng/ul,但电泳检测看不到条带,酶切电泳也看不到,会不会是质粒丢失?但为啥可以在抗生素的培养基中生长?
目的片段2.5kb,载体6k

各位战友有没有遇到这种情况
我觉得一般情况下,质粒丢失的几率比较低。

你是怎么检测阳性克隆的呢?如果是菌落PCR的话,假阳性的几率还蛮高的。
另外,需要检测一下抗生素是否失效。
注意摇菌时要给细菌一些新鲜的空气,因为生长时耗氧的。有的质粒提取确实会出现你这种情况!
一个是看看抗生素是否过期,重新制作培养基,另外琼脂糖凝胶里是否加了EB
还没谢谢各位呢

这里补上了啊
所谓抗性标记,其实就是对付这些抗生素的,比如分解酶、修饰酶。

不含的,就被抗生素消灭掉。

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师兄微信号:shixiongcoming

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