人骨髓激光共聚焦实验案例（报告）分享

一、实验器材及试剂

1、 实验器材

2、 主要实验试剂

二、组织石蜡包埋切片实验步骤

1、取材：新鲜组织固定于 4% 多聚甲醛 24 h 以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。

2、脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75% 酒精 4 h-85% 酒精 2 h-90% 酒精 2 h-95% 酒精 1 h-无水乙醇 I 30 min-无水乙醇 II 30 min-醇苯 5-10 min-二甲苯 I 5-10 min-二甲苯 II 5-10 min-蜡 I 1 h-蜡 II 1 h-蜡 III 1 h。

3、包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

4、切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚 4μm。 切片漂浮于摊片机 40℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进 60℃ 烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。

三、激光共聚焦石蜡包埋切片实验步骤

1) 染色前，切片置 60℃ 烘烤 1 h；

2) 二甲苯І 10 min；

3) 二甲苯Ⅱ10 min；

4) 100% 乙醇 5 min；

5) 95% 乙醇 5 min；

6) 90% 乙醇 3 min；

7) 80% 乙醇 3 min；

8) 70% 乙醇 3 min；

9) 蒸馏水 8 min/次，2 次；

10) 3% H2O2-甲醇室温 20 min 抑制内源性过氧化酶；

11) 蒸馏水清洗 3 次，5 min/次；

12) 0.01M 柠檬酸钠缓冲液高温修复抗原；

13) PBS 清洗 2 次，5 min/次；

14) 5%BSA 37℃ 封闭 20 min；

15) 孵育一抗 CD105，4℃ 过夜；

16) PBS 清洗 3 次，5 min/次；

17) 孵育一抗 BMPR1a，4℃ 过夜；

18) PBS 清洗 3 次，5 min/次；

19) 孵育二抗（羊抗鼠），4℃ 过夜；

20) PBS 清洗 3 次，5 min/次；

21) 孵育二抗（羊抗兔），4℃ 过夜；

22) PBS 清洗 3 次，5 min/次；

23) DAPI 染色 10 min；

24) PBS 清洗 3 次，5 min/次；

25) 中性树脂封片后，激光共聚焦显微镜下拍照。

四、实验结果

晶莱生物是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技企业。专门从事生物实验外包服务与抗体、试剂盒、生物研究原材料等为主的生命科学产品销售与研发，涵盖了动物实验、细胞生物学、分子生物学、免疫学等研究领域。欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。