CST Tech Tips - 「ChIP 实验」你的样本染色质需交联多长时间？

美国CST中国公司(丁香通商铺)2020-05-08

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ChIP实验中，交联或固定是实验的第一步。您知道合适的交联时间是多长吗？快点击观看 Cell Signaling Technology（CST） ChIP 团队Fang Chen 博士的讲解。

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交联是防止 DNA在 3 天的 ChIP 实验中从蛋白上脱落。否则，抗体只能让靶蛋白沉淀，而不能让 DNA 沉淀。交联对转录因子和辅因子尤为重要，因为与组蛋白相比，它们的丰度更低，与 DNA 的结合更弱。

此外，与培养的细胞相比，组织是一种难度更高的样本类型，因为在组织样本中，交联剂更难以进入每个单细胞。因此，延长交联时间对转录因子和辅因子和/或组织材料有利。

但过度交联会导致染色质剪切困难，尤其是使用超声处理法片段化染色质 DNA 的情况下。因此，我们需要找到平衡，同时确保目的蛋白与 DNA 的稳固固定以及染色质的可剪切性。

根据我们的实验，对于细胞样本，无论靶蛋白的类型是组蛋白、转录因子，还是辅因子交联 10 分钟就足够了。对于组织样本，组蛋白 ChIP 中交联 10 分钟就足够了，但在转录因子和辅因子 ChIP 中，可能需要更长的交联时间（长达 30 分钟）。

如果您对某个抗体或实验步骤有疑问，您可以拨打技术热线4006-GreatQ(473287)或发送邮件至tech@cst-c.com.cn。

详细了解“ChIP”实验步骤，点我下载电子版《染色质免疫沉淀和染色质免疫沉淀测序成功指南》白皮书。

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